पौधे और रोगजनक सामग्री
इलिनोइस विश्वविद्यालय (अब यूसी डेविस) के डॉ. पैट ब्राउन द्वारा ज्वार रूपांतरण जनसंख्या (एससीपी) के रूप में जानी जाने वाली ज्वार संघटन मानचित्रण जनसंख्या प्रदान की गई थी। इसका वर्णन पहले किया जा चुका है और यह अमेरिकी वातावरण में पौधों की वृद्धि और विकास को सुगम बनाने के लिए प्रकाश-अवधि-असंवेदनशीलता और छोटे कद में परिवर्तित विविध प्रजातियों का एक संग्रह है। इस अध्ययन में इस जनसंख्या की 510 प्रजातियों का उपयोग किया गया था, हालाँकि खराब अंकुरण और अन्य गुणवत्ता नियंत्रण संबंधी समस्याओं के कारण, तीनों लक्षणों के विश्लेषण में सभी प्रजातियों का उपयोग नहीं किया गया था। अंततः 345 प्रजातियों के आँकड़ों का उपयोग काइटिन प्रतिक्रिया के विश्लेषण के लिए, 472 पंक्तियों का flg22 प्रतिक्रिया के लिए, और 456 का उपयोग TLS प्रतिरोध के लिए किया गया।बी. कुकीस्ट्रेन एलएसएलपी18 को अर्कांसस विश्वविद्यालय के डॉ. बर्ट ब्लूहम से प्राप्त किया गया था।
MAMP प्रतिक्रिया माप
इस अध्ययन में दो अलग-अलग MAMPs flg22, (जेनस्क्रिप्ट कैटलॉग# RP19986), और काइटिन का उपयोग किया गया था। ज्वार के पौधों को ग्रीनहाउस में मिट्टी (33% सनशाइन रेडी-अर्थ प्रो ग्रोइंग मिक्स) से भरे समतल पर बिछाए गए इन्सर्ट में उगाया गया था। नमूना संग्रह के दिन पत्तियों में अतिरिक्त नमी से बचने के लिए नमूना संग्रह से एक दिन पहले पौधों को पानी दिया गया था।
इन पंक्तियों को यादृच्छिक रूप से चुना गया और, तार्किक कारणों से, 60 पंक्तियों के समूहों में रोपा गया। प्रत्येक पंक्ति के लिए, तीन 'गमलों' में दो बीज प्रति पंक्ति रोपे गए। पिछले समूह के संसाधित होते ही अगले समूह में पौधे रोपे गए, जब तक कि पूरी जनसंख्या का आकलन नहीं हो गया। दोनों MAMP के लिए दो प्रायोगिक रन किए गए, जिनमें से प्रत्येक में जीनोटाइप को पुनः यादृच्छिक किया गया।
आरओएस परीक्षण पहले बताए अनुसार किए गए। संक्षेप में, प्रत्येक पंक्ति के लिए, तीन अलग-अलग गमलों में छह बीज बोए गए। परिणामी पौधों में से, एकरूपता के आधार पर तीन का चयन किया गया। जो पौधे असामान्य दिखते थे या बहुसंख्यकों की तुलना में काफी लंबे या छोटे थे, उनका उपयोग नहीं किया गया। तीन अलग-अलग 15-दिन पुराने ज्वार के पौधों की चौथी पत्ती के सबसे चौड़े हिस्से से 3 मिमी व्यास की चार पत्ती की डिस्क निकाली गईं। दो पौधों से प्रत्येक पत्ती के लिए एक डिस्क और एक पौधे से दो डिस्क, जिसमें दूसरी डिस्क जल नियंत्रक बन गई (नीचे देखें)। डिस्क को एक काले 96-वेल प्लेट में 50 µl H20 पर अलग-अलग तैराया गया, प्रकाश के संपर्क से बचने के लिए एक एल्यूमीनियम सील से सील किया गया, और रात भर कमरे के तापमान पर रखा गया। अगली सुबह 2 मिलीग्राम/मिलीलीटर केमिलीलुमिनसेंट प्रोब L-012 (वाको, कैटलॉग # 120-04891), 2 मिलीग्राम/मिलीलीटर हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (टाइप VI-A, सिग्मा-एल्ड्रिच, कैटलॉग # P6782), और 100 मिलीग्राम/मिलीलीटर काइटिन या 2 μM Flg22 का उपयोग करके एक अभिक्रिया विलयन बनाया गया। इस अभिक्रिया विलयन के 50 µl को चार कुओं में से तीन में डाला गया। चौथा कुआँ एक नकली नियंत्रण था, जिसमें MAMP को छोड़कर अभिक्रिया विलयन डाला गया था। प्रत्येक प्लेट में केवल पानी वाले चार खाली कुएँ भी शामिल किए गए थे।
अभिक्रिया विलयन मिलाने के बाद, सिनर्जी™ 2 मल्टी-डिटेक्शन माइक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक) का उपयोग करके 1 घंटे तक हर 2 मिनट में चमक मापी गई। प्लेट रीडर इस 1 घंटे के दौरान हर 2 मिनट में चमक माप लेता है। प्रत्येक वेल का मान ज्ञात करने के लिए सभी 31 रीडिंग का योग निकाला गया। प्रत्येक जीनोटाइप के लिए MAMP प्रतिक्रिया का अनुमानित मान (तीन प्रायोगिक वेल का औसत चमक मान - मॉक वेल मान) - औसत ब्लैंक वेल मान को घटाकर इस प्रकार परिकलित किया गया। ब्लैंक वेल मान लगातार शून्य के करीब रहे।
पत्ती डिस्कनिकोटियाना बेंथमियाना, एक उच्च प्रतिक्रियाशील सोरघम लाइन (SC0003), और एक कम प्रतिक्रियाशील सोरघम लाइन (PI 6069) को भी गुणवत्ता नियंत्रण उद्देश्यों के लिए प्रत्येक 96-वेल प्लेट में नियंत्रण के रूप में शामिल किया गया था।
बी. कुकीइनोकुलम तैयारी और टीकाकरण
बी. कुकीइनोकुलम पहले बताए अनुसार तैयार किया गया था। संक्षेप में, ज्वार के दानों को तीन दिनों तक पानी में भिगोया गया, धोया गया, 1 लीटर शंक्वाकार फ्लास्क में डाला गया और 15 psi और 121 °C पर एक घंटे के लिए ऑटोक्लेव किया गया। फिर दानों को लगभग 5 मिली ताज़ी कल्चर से प्राप्त मसेरेटेड माइसीलिया से टीका लगाया गया।बी. कुकीएलएसएलपी18 पृथककों को कमरे के तापमान पर 2 सप्ताह के लिए छोड़ दिया गया, हर 3 दिन में फ्लास्क को हिलाते रहे। 2 सप्ताह के बाद, कवक ग्रस्त ज्वार के दानों को हवा में सुखाया गया और फिर खेत में टीकाकरण तक 4°C पर संग्रहीत किया गया। पूरे परीक्षण के लिए एक ही टीका इस्तेमाल किया गया और हर साल नया बनाया गया। टीकाकरण के लिए, 6-10 संक्रमित दानों को 4-5 सप्ताह पुराने ज्वार के पौधों के चक्र में रखा गया। इन कवकों से उत्पन्न बीजाणुओं ने एक सप्ताह के भीतर युवा ज्वार के पौधों में संक्रमण शुरू कर दिया।
बीज की तैयारी
खेत में बोने से पहले, ज्वार के बीजों को लगभग 1% स्पाइराटो 480 FS कवकनाशी, 4% सेब्रिंग 480 FS कवकनाशी, 3% सोरप्रो 940 ES बीज सेफनर युक्त कवकनाशी, कीटनाशक और सेफनर के मिश्रण से उपचारित किया गया। फिर बीजों को 3 दिनों तक हवा में सुखाया गया जिससे बीजों के चारों ओर इस मिश्रण की एक पतली परत बन गई। सेफनर के उपयोग से, अंकुरण-पूर्व उपचार के रूप में डुअल मैग्नम नामक शाकनाशी का उपयोग संभव हो गया।
लक्ष्य पत्ती धब्बा प्रतिरोध का मूल्यांकन
एससीपी को क्लेटन, एनसी में केंद्रीय फसल अनुसंधान स्टेशन में 14-15 जून 2017 और 20 जून 2018 को एक यादृच्छिक पूर्ण ब्लॉक डिजाइन में प्रत्येक मामले में दो प्रयोगात्मक प्रतिकृति के साथ लगाया गया था। प्रयोगों को 1.8 मीटर एकल पंक्तियों में 0.9 मीटर पंक्ति चौड़ाई के साथ प्रति प्लॉट 10 बीजों का उपयोग करके लगाया गया था। किनारे के प्रभावों को रोकने के लिए प्रत्येक प्रयोग की परिधि के आसपास दो सीमा पंक्तियों को लगाया गया था। प्रयोगों को 20 जुलाई, 2017 और 20 जुलाई 2018 को टीका लगाया गया था, जिस बिंदु पर ज्वार के पौधे विकास चरण 3 पर थे। रेटिंग एक से नौ के पैमाने पर ली गई थी, जहां पौधों में बीमारी के कोई लक्षण नहीं दिखने पर नौ के रूप में स्कोर किया गया था और पूरी तरह से मृत पौधों को एक के रूप में स्कोर किया गया था।
पोस्ट करने का समय: अप्रैल-01-2021