एडीज एजिप्टी (डिप्टेरा: कुलिसिडे) के खिलाफ लार्वानाशक और वयस्क उपचार के रूप में पौधों के आवश्यक तेलों पर आधारित टेरपीन यौगिकों का संयोजन

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पौधों से प्राप्त कीटनाशक यौगिकों का संयोजन कीटों के विरुद्ध सहक्रियात्मक या विरोधी अंतःक्रिया प्रदर्शित कर सकता है।एडीज मच्छरों द्वारा फैलाई जाने वाली बीमारियों के तेजी से फैलने और पारंपरिक कीटनाशकों के प्रति एडीज मच्छरों की आबादी की बढ़ती प्रतिरोधक क्षमता को देखते हुए, पौधों के आवश्यक तेलों पर आधारित टेरपीन यौगिकों के अट्ठाईस संयोजन तैयार किए गए और एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों के खिलाफ परीक्षण किया गया।पांच पौधों के आवश्यक तेलों (ईओ) का प्रारंभ में उनकी लार्विसाइडल और वयस्क-उपयोग प्रभावकारिता के लिए मूल्यांकन किया गया था, और जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख यौगिकों की पहचान की गई थी।मुख्य पहचाने गए यौगिक खरीदे गए, अर्थात् डायलिल डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, कार्वोन, लिमोनेन, यूजेनॉल, मिथाइल यूजेनॉल, यूकेलिप्टोल, यूडेस्मोल और मॉस्किटो अल्फा-पिनीन।फिर इन यौगिकों के द्विआधारी संयोजनों को सुबलथल खुराक का उपयोग करके तैयार किया गया और उनके सहक्रियात्मक और विरोधी प्रभावों का परीक्षण और निर्धारण किया गया।सर्वोत्तम लार्विसाइडल रचनाएँ लिमोनेन को डायलिल डाइसल्फ़ाइड के साथ मिलाकर प्राप्त की जाती हैं, और सर्वोत्तम वयस्कनाशक रचनाएँ कार्वोन को लिमोनेन के साथ मिलाकर प्राप्त की जाती हैं।व्यावसायिक रूप से उपयोग किए जाने वाले सिंथेटिक लार्विसाइड टेम्फोस और वयस्क दवा मैलाथियान का अलग-अलग और टेरपेनोइड्स के साथ द्विआधारी संयोजन में परीक्षण किया गया था।परिणामों से पता चला कि टेमेफोस और डायलिल डाइसल्फ़ाइड और मैलाथियान और यूडेस्मोल का संयोजन सबसे प्रभावी संयोजन था।ये शक्तिशाली संयोजन एडीज़ एजिप्टी के विरुद्ध उपयोग की क्षमता रखते हैं।
पौधों के आवश्यक तेल (ईओ) विभिन्न जैव सक्रिय यौगिकों वाले द्वितीयक मेटाबोलाइट्स हैं और सिंथेटिक कीटनाशकों के विकल्प के रूप में तेजी से महत्वपूर्ण होते जा रहे हैं।वे न केवल पर्यावरण के अनुकूल और उपयोगकर्ता के अनुकूल हैं, बल्कि वे विभिन्न बायोएक्टिव यौगिकों का मिश्रण भी हैं, जो दवा प्रतिरोध 1 विकसित होने की संभावना को भी कम करता है।जीसी-एमएस प्रौद्योगिकी का उपयोग करते हुए, शोधकर्ताओं ने विभिन्न पौधों के आवश्यक तेलों के घटकों की जांच की और 17,500 सुगंधित पौधों से 3,000 से अधिक यौगिकों की पहचान की, जिनमें से अधिकांश का कीटनाशक गुणों के लिए परीक्षण किया गया और बताया गया कि उनमें कीटनाशक प्रभाव3,4 हैं।कुछ अध्ययन इस बात पर प्रकाश डालते हैं कि यौगिक के मुख्य घटक की विषाक्तता इसके कच्चे एथिलीन ऑक्साइड के समान या उससे अधिक है।लेकिन व्यक्तिगत यौगिकों का उपयोग फिर से प्रतिरोध के विकास के लिए जगह छोड़ सकता है, जैसा कि रासायनिक कीटनाशकों5,6 के मामले में है।इसलिए, वर्तमान फोकस कीटनाशक प्रभावशीलता में सुधार करने और लक्षित कीट आबादी में प्रतिरोध की संभावना को कम करने के लिए एथिलीन ऑक्साइड-आधारित यौगिकों के मिश्रण तैयार करने पर है।ईओ में मौजूद व्यक्तिगत सक्रिय यौगिक ईओ की समग्र गतिविधि को प्रतिबिंबित करने वाले संयोजनों में सहक्रियात्मक या विरोधी प्रभाव प्रदर्शित कर सकते हैं, एक तथ्य जिस पर पिछले शोधकर्ताओं द्वारा किए गए अध्ययनों में अच्छी तरह से जोर दिया गया है।वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम में ईओ और उसके घटक भी शामिल हैं।आवश्यक तेलों की मच्छरनाशक गतिविधि का क्यूलेक्स और एनोफिलिस मच्छरों पर बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है।कई अध्ययनों ने समग्र विषाक्तता को बढ़ाने और दुष्प्रभावों को कम करने के लिए व्यावसायिक रूप से उपयोग किए जाने वाले सिंथेटिक कीटनाशकों के साथ विभिन्न पौधों को मिलाकर प्रभावी कीटनाशक विकसित करने का प्रयास किया है।लेकिन एडीज़ एजिप्टी के विरुद्ध ऐसे यौगिकों का अध्ययन दुर्लभ है।चिकित्सा विज्ञान में प्रगति और दवाओं और टीकों के विकास ने कुछ वेक्टर-जनित बीमारियों से निपटने में मदद की है।लेकिन एडीज एजिप्टी मच्छर द्वारा प्रसारित वायरस के विभिन्न सीरोटाइप की उपस्थिति के कारण टीकाकरण कार्यक्रम विफल हो गया है।इसलिए, जब ऐसी बीमारियाँ होती हैं, तो बीमारी को फैलने से रोकने के लिए वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम ही एकमात्र विकल्प होता है।वर्तमान परिदृश्य में, एडीज एजिप्टी पर नियंत्रण बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि यह विभिन्न वायरस और उनके सीरोटाइप का प्रमुख वाहक है जो डेंगू बुखार, जीका, डेंगू रक्तस्रावी बुखार, पीला बुखार आदि का कारण बनता है। सबसे उल्लेखनीय बात यह है कि इसकी संख्या मिस्र में लगभग सभी वेक्टर-जनित एडीज-जनित बीमारियों के मामले हर साल बढ़ रहे हैं और दुनिया भर में बढ़ रहे हैं।इसलिए, इस संदर्भ में, एडीज एजिप्टी आबादी के लिए पर्यावरण के अनुकूल और प्रभावी नियंत्रण उपायों को विकसित करने की तत्काल आवश्यकता है।इस संबंध में संभावित उम्मीदवार ईओ, उनके घटक यौगिक और उनके संयोजन हैं।इसलिए, इस अध्ययन में एडीज एजिप्टी के खिलाफ कीटनाशक गुणों वाले पांच पौधों (यानी, पुदीना, पवित्र तुलसी, नीलगिरी स्पॉट, एलियम सल्फर और मेलेलुका) से प्रमुख पौधे ईओ यौगिकों के प्रभावी सहक्रियात्मक संयोजन की पहचान करने का प्रयास किया गया।
सभी चयनित ईओ ने 0.42 से 163.65 पीपीएम तक 24-एच एलसी50 के साथ एडीज एजिप्टी के खिलाफ संभावित लार्विसाइडल गतिविधि का प्रदर्शन किया।उच्चतम लार्विसाइडल गतिविधि पेपरमिंट (एमपी) ईओ के लिए 24 घंटे में 0.42 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ दर्ज की गई, इसके बाद लहसुन (एएस) के लिए 24 घंटे में 16.19 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ दर्ज की गई (तालिका 1)।
ओसीमम सेंटटम, ओएस ईओ के अपवाद के साथ, अन्य सभी चार स्क्रीन किए गए ईओ ने स्पष्ट एलर्जी संबंधी प्रभाव दिखाया, जिसमें 24 घंटे की एक्सपोज़र अवधि में एलसी 50 मान 23.37 से 120.16 पीपीएम तक थे।थाइमोफिलस स्ट्रिएटा (सीएल) ईओ एक्सपोज़र के 24 घंटों के भीतर 23.37 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ वयस्कों को मारने में सबसे प्रभावी था, इसके बाद यूकेलिप्टस मैक्युलाटा (ईएम) था जिसका एलसी50 मान 101.91 पीपीएम था (तालिका 1)।दूसरी ओर, ओएस के लिए एलसी50 मूल्य अभी तक निर्धारित नहीं किया गया है क्योंकि उच्चतम खुराक पर 53% की उच्चतम मृत्यु दर दर्ज की गई थी (पूरक चित्र 3)।
प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख घटक यौगिकों की पहचान और चयन एनआईएसटी लाइब्रेरी डेटाबेस परिणामों, जीसी क्रोमैटोग्राम क्षेत्र प्रतिशत और एमएस स्पेक्ट्रा परिणामों (तालिका 2) के आधार पर किया गया था।ईओ अस के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड थे;ईओ एमपी के लिए पहचाने गए मुख्य यौगिक कार्वोन और लिमोनेन थे, ईओ एम के लिए पहचाने गए मुख्य यौगिक यूडेस्मोल और यूकेलिप्टोल थे;ईओ ओएस के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक यूजेनॉल और मिथाइल यूजेनॉल थे, और ईओ सीएल के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक यूजेनॉल और α-पिनीन थे (चित्रा 1, पूरक आंकड़े 5-8, पूरक तालिका 1-5)।
चयनित आवश्यक तेलों के मुख्य टेरपेनोइड्स के मास स्पेक्ट्रोमेट्री के परिणाम (ए-डायलील डाइसल्फ़ाइड; बी-डायलील ट्राइसल्फ़ाइड; सी-यूजेनॉल; डी-मिथाइल यूजेनॉल; ई-लिमोनेन; एफ-एरोमैटिक सेपेरोन; जी-α-पिनीन; एच-सिनेओल) ; आर-यूडामोल).
कुल नौ यौगिकों (डायलील डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, यूजेनॉल, मिथाइल यूजेनॉल, कार्वोन, लिमोनेन, यूकेलिप्टोल, यूडेस्मोल, α-पिनीन) को प्रभावी यौगिकों के रूप में पहचाना गया था जो ईओ के मुख्य घटक हैं और लार्वा में एडीज एजिप्टी के खिलाफ व्यक्तिगत रूप से जैव परीक्षण किया गया था। चरणों..यौगिक यूडेस्मोल में 24 घंटे के एक्सपोज़र के बाद 2.25 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ उच्चतम लार्विसाइडल गतिविधि थी।यौगिकों डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड में भी संभावित लार्विसाइडल प्रभाव पाए गए हैं, जिनकी औसत सुबलथल खुराक 10-20 पीपीएम की सीमा में है।63.35 पीपीएम, 139.29 पीपीएम के एलसी50 मूल्यों के साथ यौगिकों यूजेनॉल, लिमोनेन और यूकेलिप्टोल के लिए मध्यम लार्विसाइडल गतिविधि फिर से देखी गई।और 24 घंटों के बाद क्रमशः 181.33 पीपीएम (तालिका 3)।हालाँकि, उच्चतम खुराक पर भी मिथाइल यूजेनॉल और कार्वोन की कोई महत्वपूर्ण लार्विसाइडल क्षमता नहीं पाई गई, इसलिए LC50 मूल्यों की गणना नहीं की गई (तालिका 3)।सिंथेटिक लार्विसाइड टेमेफोस में 24 घंटे के एक्सपोजर के दौरान एडीज एजिप्टी के खिलाफ 0.43 पीपीएम की औसत घातक सांद्रता थी (तालिका 3, अनुपूरक तालिका 6)।
सात यौगिकों (डायलील डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, यूकेलिप्टोल, α-पिनीन, यूडेस्मोल, लिमोनेन और कार्वोन) को प्रभावी ईओ के मुख्य यौगिकों के रूप में पहचाना गया और वयस्क मिस्र के एडीज़ मच्छरों के खिलाफ व्यक्तिगत रूप से परीक्षण किया गया।प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण के अनुसार, यूडेसमोल में 1.82 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ उच्चतम क्षमता पाई गई, इसके बाद 24 घंटे के एक्सपोज़र समय पर 17.60 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ यूकेलिप्टोल में क्षमता पाई गई।परीक्षण किए गए शेष पांच यौगिक 140.79 से 737.01 पीपीएम (तालिका 3) तक एलसी50 वाले वयस्कों के लिए मध्यम रूप से हानिकारक थे।सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फोरस मैलाथियान यूडेस्मोल की तुलना में कम शक्तिशाली था और अन्य छह यौगिकों की तुलना में अधिक था, 24 घंटे की एक्सपोज़र अवधि में 5.44 पीपीएम के एलसी 50 मूल्य के साथ (तालिका 3, अनुपूरक तालिका 6)।
1:1 के अनुपात में उनकी एलसी50 खुराक के द्विआधारी संयोजन तैयार करने के लिए सात शक्तिशाली सीसा यौगिकों और ऑर्गेनोफॉस्फोरस टैमफोसेट का चयन किया गया था।एडीज एजिप्टी के खिलाफ उनकी लार्विसाइडल प्रभावकारिता के लिए कुल 28 बाइनरी संयोजन तैयार और परीक्षण किए गए थे।नौ संयोजन सहक्रियात्मक पाए गए, 14 संयोजन विरोधी थे, और पांच संयोजन लार्विसाइडल नहीं थे।सहक्रियात्मक संयोजनों में, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और टेमोफोल का संयोजन सबसे प्रभावी था, जिसमें 24 घंटों के बाद 100% मृत्यु दर देखी गई (तालिका 4)।इसी तरह, डायलिल डाइसल्फ़ाइड के साथ लिमोनेन और थाइमेटफ़ॉस के साथ यूजेनॉल के मिश्रण ने 98.3% की देखी गई लार्वा मृत्यु दर के साथ अच्छी क्षमता दिखाई (तालिका 5)।शेष 4 संयोजनों, अर्थात् यूडेस्मोल प्लस यूकेलिप्टोल, यूडेस्मोल प्लस लिमोनेन, यूकेलिप्टोल प्लस अल्फा-पिनीन, अल्फा-पिनीन प्लस टेमेफोस ने भी महत्वपूर्ण लार्विसाइडल प्रभावकारिता दिखाई, जिसमें मृत्यु दर 90% से अधिक देखी गई।अपेक्षित मृत्यु दर 60-75% के करीब है।(तालिका 4)।हालाँकि, α-पिनीन या यूकेलिप्टस के साथ लिमोनेन के संयोजन ने प्रतिकूल प्रतिक्रियाएँ दिखाईं।इसी तरह, यूजेनॉल या यूकेलिप्टस या यूडेस्मोल या डायलिल ट्राइसल्फाइड के साथ टेमेफोस के मिश्रण में विरोधी प्रभाव पाए गए हैं।इसी तरह, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड का संयोजन और इनमें से किसी भी यौगिक का यूडेस्मोल या यूजेनॉल के साथ संयोजन उनकी लार्विसाइडल क्रिया में विरोधी है।यूजेनॉल या α-पिनीन के साथ यूडेस्मोल के संयोजन से भी विरोध की सूचना मिली है।
वयस्क अम्लीय गतिविधि के लिए परीक्षण किए गए सभी 28 बाइनरी मिश्रणों में से 7 संयोजन सहक्रियात्मक थे, 6 का कोई प्रभाव नहीं था, और 15 विरोधी थे।यूकेलिप्टस के साथ यूडेस्मोल और कार्वोन के साथ लिमोनेन का मिश्रण अन्य सहक्रियात्मक संयोजनों की तुलना में अधिक प्रभावी पाया गया, 24 घंटों में मृत्यु दर क्रमशः 76% और 100% थी (तालिका 5)।यह देखा गया है कि मैलाथियान लिमोनेन और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड को छोड़कर यौगिकों के सभी संयोजनों के साथ एक सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित करता है।दूसरी ओर, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड और उनमें से किसी एक का यूकेलिप्टस, या यूकेलिप्टोल, या कार्वोन, या लिमोनेन के साथ संयोजन के बीच विरोध पाया गया है।इसी तरह, यूडेस्मोल या लिमोनेन के साथ α-पिनीन, कार्वोन या लिमोनेन के साथ यूकेलिप्टोल और यूडेस्मोल या मैलाथियान के साथ लिमोनेन के संयोजन ने विरोधी लार्विसाइडल प्रभाव दिखाया।शेष छह संयोजनों के लिए, अपेक्षित और देखी गई मृत्यु दर (तालिका 5) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था।
सहक्रियात्मक प्रभावों और सुबलथल खुराक के आधार पर, बड़ी संख्या में एडीज एजिप्टी मच्छरों के खिलाफ उनकी लार्विसाइडल विषाक्तता को अंततः चुना गया और आगे का परीक्षण किया गया।परिणामों से पता चला कि बाइनरी संयोजन यूजेनॉल-लिमोनेन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड-लिमोनेन और डायलिल डाइसल्फ़ाइड-टाइमफ़ॉस का उपयोग करके देखी गई लार्वा मृत्यु दर 100% थी, जबकि अपेक्षित लार्वा मृत्यु दर क्रमशः 76.48%, 72.16% और 63.4% थी (तालिका 6)।.लिमोनेन और यूडेस्मोल का संयोजन अपेक्षाकृत कम प्रभावी था, 24 घंटे की एक्सपोज़र अवधि में 88% लार्वा मृत्यु दर देखी गई (तालिका 6)।संक्षेप में, चार चयनित बाइनरी संयोजनों ने बड़े पैमाने पर लागू होने पर एडीज एजिप्टी के खिलाफ सहक्रियात्मक लार्विसाइडल प्रभाव भी प्रदर्शित किया (तालिका 6)।
वयस्क एडीज एजिप्टी की बड़ी आबादी को नियंत्रित करने के लिए एडल्टोसाइडल बायोएसे के लिए तीन सहक्रियात्मक संयोजनों का चयन किया गया था।बड़ी कीट कॉलोनियों पर परीक्षण के लिए संयोजनों का चयन करने के लिए, हमने पहले दो सर्वोत्तम सहक्रियात्मक टेरपीन संयोजनों पर ध्यान केंद्रित किया, अर्थात् कार्वोन प्लस लिमोनेन और यूकेलिप्टोल प्लस यूडेस्मोल।दूसरे, सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट मैलाथियान और टेरपेनोइड्स के संयोजन से सबसे अच्छा सहक्रियात्मक संयोजन चुना गया था।हमारा मानना ​​है कि उच्चतम देखी गई मृत्यु दर और उम्मीदवार सामग्री के बहुत कम LC50 मूल्यों के कारण बड़ी कीट कॉलोनियों पर परीक्षण के लिए मैलाथियान और यूडेस्मोल का संयोजन सबसे अच्छा संयोजन है।मैलाथियान α-पिनीन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड, यूकेलिप्टस, कार्वोन और यूडेस्मोल के साथ संयोजन में तालमेल प्रदर्शित करता है।लेकिन अगर हम LC50 मानों को देखें, तो Eudesmol का मान सबसे कम (2.25 पीपीएम) है।मैलाथियान, α-पिनीन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड, यूकेलिप्टोल और कार्वोन के परिकलित LC50 मान 5.4, 716.55, 166.02, 17.6 और 140.79 पीपीएम थे।क्रमश।ये मान दर्शाते हैं कि खुराक की दृष्टि से मैलाथियान और यूडेस्मोल का संयोजन इष्टतम संयोजन है।परिणामों से पता चला कि कार्वोन प्लस लिमोनेन और यूडेस्मोल प्लस मैलाथियान के संयोजन में 61% से 65% की अपेक्षित मृत्यु दर की तुलना में 100% मृत्यु दर देखी गई।एक अन्य संयोजन, यूडेस्मोल प्लस यूकेलिप्टोल, ने जोखिम के 24 घंटों के बाद 78.66% की मृत्यु दर दिखाई, जबकि अपेक्षित मृत्यु दर 60% थी।सभी तीन चयनित संयोजनों ने वयस्क एडीज एजिप्टी (तालिका 6) के खिलाफ बड़े पैमाने पर लागू होने पर भी सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया।
इस अध्ययन में, एमपी, एएस, ओएस, एम और सीएल जैसे चयनित पौधों के ईओ ने एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर आशाजनक घातक प्रभाव दिखाया।एमपी ईओ में 0.42 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ उच्चतम लार्विसाइडल गतिविधि थी, इसके बाद 24 घंटे के बाद 50 पीपीएम से कम के एलसी50 मान के साथ एएस, ओएस और एम ईओ थे।ये परिणाम मच्छरों और अन्य द्विध्रुवीय मक्खियों10,11,12,13,14 के पिछले अध्ययनों के अनुरूप हैं।यद्यपि सीएल की लार्वानाशक क्षमता अन्य आवश्यक तेलों की तुलना में कम है, 24 घंटों के बाद 163.65 पीपीएम के एलसी50 मूल्य के साथ, इसकी वयस्क क्षमता 24 घंटों के बाद 23.37 पीपीएम के एलसी50 मूल्य के साथ सबसे अधिक है।एमपी, एएस और ईएम ईओ ने भी 24 घंटे के एक्सपोज़र पर 100-120 पीपीएम की सीमा में एलसी50 मूल्यों के साथ अच्छी एलर्जी संबंधी क्षमता दिखाई, लेकिन उनकी लार्वासाइडल प्रभावकारिता से अपेक्षाकृत कम थी।दूसरी ओर, ईओ ओएस ने उच्चतम चिकित्सीय खुराक पर भी नगण्य एलर्जी संबंधी प्रभाव प्रदर्शित किया।इस प्रकार, परिणाम दर्शाते हैं कि पौधों के लिए एथिलीन ऑक्साइड की विषाक्तता मच्छरों के विकास चरण के आधार पर भिन्न हो सकती है।यह कीट के शरीर में ईओ के प्रवेश की दर, विशिष्ट लक्ष्य एंजाइमों के साथ उनकी बातचीत और प्रत्येक विकासात्मक चरण16 में मच्छर की विषहरण क्षमता पर भी निर्भर करता है।बड़ी संख्या में अध्ययनों से पता चला है कि मुख्य घटक यौगिक एथिलीन ऑक्साइड की जैविक गतिविधि में एक महत्वपूर्ण कारक है, क्योंकि यह कुल यौगिकों 3,12,17,18 के बहुमत के लिए जिम्मेदार है।इसलिए, हमने प्रत्येक ईओ में दो मुख्य यौगिकों पर विचार किया।जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड को ईओ एएस के प्रमुख यौगिकों के रूप में पहचाना गया, जो पिछली रिपोर्ट 19,20,21 अनुरूप है।हालांकि पिछली रिपोर्टों से संकेत मिलता है कि मेन्थॉल इसके मुख्य यौगिकों में से एक था, कार्वोन और लिमोनेन को फिर से एमपी ईओ22,23 के मुख्य यौगिकों के रूप में पहचाना गया था।ओएस ईओ की संरचना प्रोफ़ाइल से पता चला कि यूजेनॉल और मिथाइल यूजेनॉल मुख्य यौगिक हैं, जो पहले के शोधकर्ताओं के निष्कर्षों के समान है।यूकेलिप्टोल और यूकेलिप्टोल को एम लीफ ऑयल में मौजूद मुख्य यौगिकों के रूप में बताया गया है, जो कुछ शोधकर्ताओं25,26 के निष्कर्षों के अनुरूप है लेकिन ओलालाडे एट अल.27 के निष्कर्षों के विपरीत है।मेलेलुका आवश्यक तेल में सिनेओल और α-पिनीन का प्रभुत्व देखा गया, जो पिछले अध्ययन समान है।विभिन्न स्थानों में एक ही पौधों की प्रजातियों से निकाले गए आवश्यक तेलों की संरचना और एकाग्रता में अंतर-विशिष्ट अंतर रिपोर्ट किए गए हैं और इस अध्ययन में भी देखे गए हैं, जो भौगोलिक पौधों की वृद्धि की स्थिति, फसल के समय, विकासात्मक चरण या पौधे की उम्र से प्रभावित होते हैं।रसायनप्ररूपों की उपस्थिति, आदि.22,30,31,32.प्रमुख पहचाने गए यौगिकों को तब खरीदा गया और वयस्क एडीज एजिप्टी मच्छरों पर उनके लार्विसाइडल प्रभावों और प्रभावों के लिए परीक्षण किया गया।परिणामों से पता चला कि डायलिल डाइसल्फ़ाइड की लार्विसाइडल गतिविधि कच्चे ईओ एएस के बराबर थी।लेकिन डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड की गतिविधि ईओ अस से अधिक है।ये परिणाम किम्बारिस एट अल द्वारा प्राप्त परिणामों के समान हैं।33 क्यूलेक्स फिलीपींस पर।हालाँकि, इन दोनों यौगिकों ने लक्ष्य मच्छरों के खिलाफ अच्छी ऑटोसाइडल गतिविधि नहीं दिखाई, जो कि टेनेब्रियो मोलिटर पर प्लाटा-रुएडा एट अल 34 के परिणामों के अनुरूप है।ओएस ईओ एडीज एजिप्टी के लार्वा चरण के खिलाफ प्रभावी है, लेकिन वयस्क चरण के खिलाफ नहीं।यह स्थापित किया गया है कि मुख्य व्यक्तिगत यौगिकों की लार्विसाइडल गतिविधि कच्चे ओएस ईओ की तुलना में कम है।इसका तात्पर्य क्रूड एथिलीन ऑक्साइड में अन्य यौगिकों और उनकी अंतःक्रियाओं की भूमिका से है।अकेले मिथाइल यूजेनॉल में नगण्य गतिविधि होती है, जबकि अकेले यूजेनॉल में मध्यम लार्वानाशक गतिविधि होती है।यह निष्कर्ष, एक ओर, 35,36 की पुष्टि करता है, और दूसरी ओर, पहले के शोधकर्ताओं 37,38 के निष्कर्षों का खंडन करता है।यूजेनॉल और मिथाइल्यूजेनॉल के कार्यात्मक समूहों में अंतर के परिणामस्वरूप एक ही लक्ष्य कीट के लिए अलग-अलग विषाक्तता हो सकती है।लिमोनेन में मध्यम लार्विसाइडल गतिविधि पाई गई, जबकि कार्वोन का प्रभाव नगण्य था।इसी प्रकार, वयस्क कीड़ों के लिए लिमोनेन की अपेक्षाकृत कम विषाक्तता और कार्वोन की उच्च विषाक्तता पिछले कुछ अध्ययनों40 के परिणामों का समर्थन करती है लेकिन अन्य41 का खंडन करती है।इंट्रासाइक्लिक और एक्सोसाइक्लिक दोनों स्थितियों में दोहरे बंधनों की उपस्थिति इन यौगिकों के लाभ को लार्विसाइड्स3,41 के रूप में बढ़ा सकती है, जबकि कार्वोन, जो असंतृप्त अल्फा और बीटा कार्बन के साथ एक कीटोन है, वयस्कों42 में विषाक्तता की उच्च क्षमता प्रदर्शित कर सकता है।हालाँकि, लिमोनेन और कार्वोन की व्यक्तिगत विशेषताएँ कुल ईओ एमपी (तालिका 1, तालिका 3) की तुलना में बहुत कम हैं।परीक्षण किए गए टेरपेनोइड्स में, यूडेसमोल में 2.5 पीपीएम से कम एलसी50 मान के साथ सबसे बड़ी लार्विसाइडल और वयस्क गतिविधि पाई गई, जिससे यह एडीज मच्छरों के नियंत्रण के लिए एक आशाजनक यौगिक बन गया।इसका प्रदर्शन संपूर्ण ईओ एम की तुलना में बेहतर है, हालांकि यह चेंग एट अल.40 के निष्कर्षों के अनुरूप नहीं है।यूडेस्मोल दो आइसोप्रीन इकाइयों वाला एक सेस्क्यूटरपीन है जो यूकेलिप्टस जैसे ऑक्सीजन युक्त मोनोटेरपीन की तुलना में कम अस्थिर है और इसलिए इसमें कीटनाशक के रूप में अधिक क्षमता है।यूकेलिप्टोल में लार्विसाइडल गतिविधि की तुलना में अधिक वयस्कता है, और पहले के अध्ययनों के परिणाम इसका समर्थन और खंडन दोनों करते हैं।अकेले गतिविधि लगभग संपूर्ण ईओ सीएल की तुलना में है।एक अन्य बाइसिकल मोनोटेरपीन, α-पिनीन, का एडीज एजिप्टी पर लार्वासाइडल प्रभाव की तुलना में कम वयस्क प्रभाव होता है, जो पूर्ण ईओ सीएल के प्रभाव के विपरीत है।टेरपेनोइड्स की समग्र कीटनाशक गतिविधि उनकी लिपोफिलिसिटी, अस्थिरता, कार्बन शाखा, प्रक्षेपण क्षेत्र, सतह क्षेत्र, कार्यात्मक समूहों और उनकी स्थिति45,46 से प्रभावित होती है।ये यौगिक कोशिका संचय को नष्ट करके, श्वसन गतिविधि को अवरुद्ध करके, तंत्रिका आवेगों के संचरण को बाधित करके कार्य कर सकते हैं। 47 सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट टेमेफोस में 0.43 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ उच्चतम लार्विसाइडल गतिविधि पाई गई, जो लेक के डेटा के अनुरूप है - उटाला48.सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फोरस मैलाथियान की वयस्क गतिविधि 5.44 पीपीएम पर दर्ज की गई थी।हालाँकि इन दोनों ऑर्गनोफॉस्फेट ने एडीज एजिप्टी के प्रयोगशाला उपभेदों के खिलाफ अनुकूल प्रतिक्रिया दिखाई है, लेकिन दुनिया के विभिन्न हिस्सों में इन यौगिकों के प्रति मच्छरों के प्रतिरोध की सूचना मिली है।हालाँकि, हर्बल दवाओं के प्रति प्रतिरोध के विकास की कोई समान रिपोर्ट नहीं मिली है50।इस प्रकार, वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रमों में वनस्पति विज्ञान को रासायनिक कीटनाशकों के संभावित विकल्प के रूप में माना जाता है।
लार्विसाइडल प्रभाव का परीक्षण थाइमेटफोस के साथ शक्तिशाली टेरपेनोइड्स और टेरपेनोइड्स से तैयार किए गए 28 बाइनरी संयोजनों (1:1) पर किया गया था, और 9 संयोजन सहक्रियात्मक, 14 विरोधी और 5 विरोधी पाए गए।कोई प्रभाव नहीं।दूसरी ओर, वयस्क पोटेंसी बायोएसे में, 7 संयोजन सहक्रियात्मक पाए गए, 15 संयोजन विरोधी थे, और 6 संयोजनों का कोई प्रभाव नहीं होने की सूचना मिली थी।कुछ संयोजनों द्वारा सहक्रियात्मक प्रभाव उत्पन्न करने का कारण विभिन्न महत्वपूर्ण मार्गों में एक साथ संपर्क करने वाले उम्मीदवार यौगिकों या किसी विशेष जैविक मार्ग 51 के विभिन्न प्रमुख एंजाइमों के अनुक्रमिक निषेध के कारण हो सकता है।डायलिल डाइसल्फ़ाइड, यूकेलिप्टस या यूजेनॉल के साथ लिमोनेन का संयोजन छोटे और बड़े पैमाने के अनुप्रयोगों (तालिका 6) दोनों में सहक्रियात्मक पाया गया, जबकि यूकेलिप्टस या α-पिनीन के साथ इसके संयोजन का लार्वा पर प्रतिकूल प्रभाव पाया गया।औसतन, लिमोनेन एक अच्छा सहक्रियाशील प्रतीत होता है, संभवतः मिथाइल समूहों की उपस्थिति, स्ट्रेटम कॉर्नियम में अच्छी पैठ और क्रिया के एक अलग तंत्र52,53 के कारण।यह पहले बताया गया है कि लिमोनेन कीट क्यूटिकल्स (संपर्क विषाक्तता) में प्रवेश करके, पाचन तंत्र (एंटीफीडेंट) को प्रभावित करके, या श्वसन प्रणाली (धूमन गतिविधि) को प्रभावित करके विषाक्त प्रभाव पैदा कर सकता है, 54 जबकि यूजेनॉल जैसे फेनिलप्रोपानोइड्स चयापचय एंजाइमों 55 को प्रभावित कर सकते हैं। इसलिए, क्रिया के विभिन्न तंत्रों वाले यौगिकों का संयोजन मिश्रण के समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकता है।यूकेलिप्टोल को डायलिल डाइसल्फ़ाइड, यूकेलिप्टस या α-पिनीन के साथ सहक्रियाशील पाया गया, लेकिन अन्य यौगिकों के साथ अन्य संयोजन या तो गैर-लार्विसाइडल या विरोधी थे।प्रारंभिक अध्ययनों से पता चला है कि यूकेलिप्टोल में एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ (एसीएचई), साथ ही ऑक्टामाइन और जीएबीए रिसेप्टर्स56 पर निरोधात्मक गतिविधि है।चूँकि चक्रीय मोनोटेरपीन, यूकेलिप्टोल, यूजेनॉल आदि की क्रिया का तंत्र उनकी न्यूरोटॉक्सिक गतिविधि के समान हो सकता है, 57 जिससे पारस्परिक निषेध के माध्यम से उनके संयुक्त प्रभाव कम हो जाते हैं।इसी तरह, डायलिल डाइसल्फ़ाइड, α-पिनीन और लिमोनेन के साथ टेमेफ़ोस का संयोजन सहक्रियात्मक पाया गया, जो हर्बल उत्पादों और सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट्स58 के बीच सहक्रियात्मक प्रभाव की पिछली रिपोर्टों का समर्थन करता है।
यूडेस्मोल और यूकेलिप्टोल के संयोजन का एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर एक सहक्रियात्मक प्रभाव पाया गया, संभवतः उनकी विभिन्न रासायनिक संरचनाओं के कारण उनकी क्रिया के विभिन्न तरीकों के कारण।यूडेस्मोल (एक सेस्क्यूटरपीन) श्वसन प्रणाली 59 को प्रभावित कर सकता है और यूकेलिप्टोल (एक मोनोटेरपीन) एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ 60 को प्रभावित कर सकता है।दो या दो से अधिक लक्ष्य स्थलों पर अवयवों का सह-प्रदर्शन संयोजन के समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकता है।वयस्क पदार्थ बायोएसेज़ में, मैलाथियान को कार्वोन या यूकेलिप्टोल या यूकेलिप्टोल या डायलिल डाइसल्फ़ाइड या α-पिनीन के साथ सहक्रियाशील पाया गया, जो दर्शाता है कि यह लिमोनेन और डाई के अतिरिक्त के साथ सहक्रियात्मक है।एलिल ट्राइसल्फ़ाइड के अपवाद के साथ, टेरपीन यौगिकों के पूरे पोर्टफोलियो के लिए अच्छे सहक्रियात्मक एलर्जीनाशक उम्मीदवार।थंगम और काथिरेसन61 ने भी हर्बल अर्क के साथ मैलाथियान के सहक्रियात्मक प्रभाव के समान परिणामों की सूचना दी।यह सहक्रियात्मक प्रतिक्रिया कीट विषहरण एंजाइमों पर मैलाथियान और फाइटोकेमिकल्स के संयुक्त विषाक्त प्रभाव के कारण हो सकती है।मैलाथियान जैसे ऑर्गनोफॉस्फेट आमतौर पर साइटोक्रोम P450 एस्टरेज़ और मोनोऑक्सीजिनेस62,63,64 को रोककर कार्य करते हैं।इसलिए, क्रिया के इन तंत्रों के साथ मैलाथियान और क्रिया के विभिन्न तंत्रों के साथ टेरपेन्स का संयोजन मच्छरों पर समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकता है।
दूसरी ओर, विरोध इंगित करता है कि चयनित यौगिक अकेले प्रत्येक यौगिक की तुलना में संयोजन में कम सक्रिय हैं।कुछ संयोजनों में विरोध का कारण यह हो सकता है कि एक यौगिक अवशोषण, वितरण, चयापचय या उत्सर्जन की दर को बदलकर दूसरे यौगिक के व्यवहार को संशोधित करता है।प्रारंभिक शोधकर्ताओं ने इसे दवा संयोजनों में विरोध का कारण माना।अणु संभावित तंत्र 65. इसी प्रकार, विरोध के संभावित कारण क्रिया के समान तंत्र, एक ही रिसेप्टर या लक्ष्य साइट के लिए घटक यौगिकों की प्रतिस्पर्धा से संबंधित हो सकते हैं।कुछ मामलों में, लक्ष्य प्रोटीन का गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोध भी हो सकता है।इस अध्ययन में, दो ऑर्गेनोसल्फर यौगिकों, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड ने, संभवतः एक ही लक्ष्य स्थल के लिए प्रतिस्पर्धा के कारण, विरोधी प्रभाव दिखाया।इसी तरह, इन दो सल्फर यौगिकों ने विरोधी प्रभाव दिखाया और यूडेस्मोल और α-पिनीन के साथ मिलाने पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।यूडेस्मोल और अल्फा-पिनीन प्रकृति में चक्रीय हैं, जबकि डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड स्निग्ध प्रकृति के हैं।रासायनिक संरचना के आधार पर, इन यौगिकों के संयोजन से समग्र घातक गतिविधि में वृद्धि होनी चाहिए क्योंकि उनके लक्ष्य स्थल आमतौर पर भिन्न होते हैं, लेकिन प्रयोगात्मक रूप से हमने विरोध पाया, जो कि विवो में कुछ अज्ञात जीवों में इन यौगिकों की भूमिका के कारण हो सकता है।परस्पर क्रिया के परिणामस्वरूप सिस्टम।इसी तरह, सिनेओल और α-पिनीन के संयोजन ने विरोधी प्रतिक्रियाएं उत्पन्न कीं, हालांकि शोधकर्ताओं ने पहले बताया था कि दोनों यौगिकों की कार्रवाई के अलग-अलग लक्ष्य हैं।चूंकि दोनों यौगिक चक्रीय मोनोटेरपीन हैं, इसलिए कुछ सामान्य लक्ष्य साइटें हो सकती हैं जो बंधन के लिए प्रतिस्पर्धा कर सकती हैं और अध्ययन किए गए कॉम्बिनेटरियल जोड़े की समग्र विषाक्तता को प्रभावित कर सकती हैं।
LC50 मूल्यों और देखी गई मृत्यु दर के आधार पर, दो सर्वोत्तम सहक्रियात्मक टेरपीन संयोजनों का चयन किया गया, अर्थात् कार्वोन + लिमोनेन और यूकेलिप्टोल + यूडेस्मोल के जोड़े, साथ ही टेरपेन्स के साथ सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फोरस मैलाथियान।मैलाथियान + यूडेस्मोल यौगिकों के इष्टतम सहक्रियात्मक संयोजन का एक वयस्क कीटनाशक जैव परख में परीक्षण किया गया था।यह पुष्टि करने के लिए बड़ी कीट कॉलोनियों को लक्षित करें कि क्या ये प्रभावी संयोजन अपेक्षाकृत बड़े जोखिम वाले स्थानों पर बड़ी संख्या में व्यक्तियों के खिलाफ काम कर सकते हैं।ये सभी संयोजन कीड़ों के बड़े झुंडों के खिलाफ एक सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित करते हैं।एडीज एजिप्टी लार्वा की बड़ी आबादी के खिलाफ परीक्षण किए गए इष्टतम सहक्रियात्मक लार्विसाइडल संयोजन के लिए समान परिणाम प्राप्त किए गए थे।इस प्रकार, यह कहा जा सकता है कि पादप ईओ यौगिकों का प्रभावी सहक्रियात्मक लार्विसाइडल और एडल्टिसाइडल संयोजन मौजूदा सिंथेटिक रसायनों के खिलाफ एक मजबूत उम्मीदवार है और इसका उपयोग एडीज एजिप्टी आबादी को नियंत्रित करने के लिए किया जा सकता है।इसी तरह, मच्छरों को दी जाने वाली थाइमेटफोस या मैलाथियान की खुराक को कम करने के लिए टेरपेन्स के साथ सिंथेटिक लार्विसाइड्स या एडल्टिसाइड्स के प्रभावी संयोजन का भी उपयोग किया जा सकता है।ये शक्तिशाली सहक्रियात्मक संयोजन एडीज मच्छरों में दवा प्रतिरोध के विकास पर भविष्य के अध्ययन के लिए समाधान प्रदान कर सकते हैं।
एडीज एजिप्टी के अंडों को क्षेत्रीय चिकित्सा अनुसंधान केंद्र, डिब्रूगढ़, भारतीय चिकित्सा अनुसंधान परिषद से एकत्र किया गया और जूलॉजी विभाग, गौहाटी विश्वविद्यालय में नियंत्रित तापमान (28 ± 1 डिग्री सेल्सियस) और आर्द्रता (85 ± 5%) के तहत रखा गया। निम्नलिखित स्थितियाँ: अरिवोली का वर्णन किया गया और अन्य।अंडे सेने के बाद, लार्वा को लार्वा भोजन (कुत्ते के बिस्किट पाउडर और यीस्ट 3:1 के अनुपात में) खिलाया गया और वयस्कों को 10% ग्लूकोज समाधान खिलाया गया।उभरने के तीसरे दिन से, वयस्क मादा मच्छरों को अल्बिनो चूहों का खून चूसने की अनुमति दी गई।फिल्टर पेपर को एक गिलास में पानी में भिगोकर अंडे देने वाले पिंजरे में रख दें।
चयनित पौधों के नमूने अर्थात् यूकेलिप्टस की पत्तियां (मायरटेसी), पवित्र तुलसी (लैमियासी), पुदीना (लैमियासी), मेलेलुका (मायरटेसी) और एलियम बल्ब (अमेरीलिडेसी)।गुवाहाटी से एकत्र किया गया और गौहाटी विश्वविद्यालय के वनस्पति विज्ञान विभाग द्वारा पहचाना गया।एकत्र किए गए पौधे के नमूने (500 ग्राम) को 6 घंटे के लिए क्लीवेंजर उपकरण का उपयोग करके हाइड्रोडिस्टिलेशन के अधीन किया गया था।निकाले गए ईओ को साफ कांच की शीशियों में एकत्र किया गया और आगे के अध्ययन के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया।
थोड़ा संशोधित मानक विश्व स्वास्थ्य संगठन प्रक्रियाओं 67 का उपयोग करके लार्विसाइडल विषाक्तता का अध्ययन किया गया था।डीएमएसओ को इमल्सीफायर के रूप में उपयोग करें।प्रत्येक ईओ सांद्रता का प्रारंभ में 100 और 1000 पीपीएम पर परीक्षण किया गया, जिससे प्रत्येक प्रतिकृति में 20 लार्वा उजागर हुए।परिणामों के आधार पर, एक एकाग्रता सीमा लागू की गई और मृत्यु दर 1 घंटे से 6 घंटे (1 घंटे के अंतराल पर), और उपचार के बाद 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे तक दर्ज की गई।सुबलथल सांद्रता (LC50) एक्सपोज़र के 24, 48 और 72 घंटों के बाद निर्धारित की गई थी।प्रत्येक सांद्रता को एक नकारात्मक नियंत्रण (केवल पानी) और एक सकारात्मक नियंत्रण (डीएमएसओ-उपचारित पानी) के साथ तीन प्रतियों में जांचा गया।यदि प्यूपेशन होता है और नियंत्रण समूह के 10% से अधिक लार्वा मर जाते हैं, तो प्रयोग दोहराया जाता है।यदि नियंत्रण समूह में मृत्यु दर 5-10% के बीच है, तो एबट सुधार सूत्र 68 का उपयोग करें।
रामर एट अल द्वारा वर्णित विधि।69 का उपयोग विलायक के रूप में एसीटोन का उपयोग करके एडीज एजिप्टी के खिलाफ एक वयस्क जैव परीक्षण के लिए किया गया था।प्रत्येक ईओ का प्रारंभ में 100 और 1000 पीपीएम की सांद्रता पर वयस्क एडीज एजिप्टी मच्छरों के खिलाफ परीक्षण किया गया था।प्रत्येक तैयार घोल का 2 मिलीलीटर व्हाटमैन नंबर पर लगाएं।फिल्टर पेपर का 1 टुकड़ा (आकार 12 x 15 सेमी2) और एसीटोन को 10 मिनट तक वाष्पित होने दें।नियंत्रण के रूप में केवल 2 मिलीलीटर एसीटोन से उपचारित फिल्टर पेपर का उपयोग किया गया था।एसीटोन के वाष्पित हो जाने के बाद, उपचारित फिल्टर पेपर और नियंत्रण फिल्टर पेपर को एक बेलनाकार ट्यूब (10 सेमी गहरी) में रखा जाता है।3 से 4 दिन के दस गैर-खून पीने वाले मच्छरों को प्रत्येक सांद्रता की तीन प्रतियों में स्थानांतरित किया गया।प्रारंभिक परीक्षणों के परिणामों के आधार पर, चयनित तेलों की विभिन्न सांद्रता का परीक्षण किया गया।मच्छर निकलने के बाद मृत्यु दर 1 घंटे, 2 घंटे, 3 घंटे, 4 घंटे, 5 घंटे, 6 घंटे, 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे में दर्ज की गई।24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे के एक्सपोज़र समय के लिए एलसी50 मानों की गणना करें।यदि नियंत्रण समूह की मृत्यु दर 20% से अधिक है, तो संपूर्ण परीक्षण दोहराएं।इसी तरह, यदि नियंत्रण समूह में मृत्यु दर 5% से अधिक है, तो एबॉट के सूत्र68 का उपयोग करके उपचारित नमूनों के परिणामों को समायोजित करें।
चयनित आवश्यक तेलों के घटक यौगिकों का विश्लेषण करने के लिए गैस क्रोमैटोग्राफी (एगिलेंट 7890ए) और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एक्यू टीओएफ जीसीवी, जियोल) का प्रदर्शन किया गया।GC एक FID डिटेक्टर और एक केशिका स्तंभ (HP5-MS) से सुसज्जित था।वाहक गैस हीलियम थी, प्रवाह दर 1 मिली/मिनट थी।जीसी कार्यक्रम एलियम सैटिवम को 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M और ओसीमम सेंटटम को 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 - 280 पर सेट करता है। टकसाल के लिए 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280, नीलगिरी के लिए 20.60-1M-10-200-3M-30-280, और लाल के लिए एक हजार परतों के लिए वे हैं 10: 60-1M-8-220-5M-8-270-3M.
प्रत्येक ईओ के प्रमुख यौगिकों की पहचान जीसी क्रोमैटोग्राम और मास स्पेक्ट्रोमेट्री परिणामों (एनआईएसटी 70 मानक डेटाबेस के संदर्भ में) से गणना किए गए क्षेत्र प्रतिशत के आधार पर की गई थी।
प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख यौगिकों को जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर चुना गया था और आगे के बायोएसेज़ के लिए सिग्मा-एल्ड्रिच से 98-99% शुद्धता पर खरीदा गया था।जैसा कि ऊपर वर्णित है, यौगिकों का एडीज एजिप्टी के खिलाफ लार्विसाइडल और वयस्क प्रभावकारिता के लिए परीक्षण किया गया था।सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले सिंथेटिक लार्विसाइड्स टैमफोसेट (सिग्मा एल्ड्रिच) और वयस्क दवा मैलाथियान (सिग्मा एल्ड्रिच) का उसी प्रक्रिया का पालन करते हुए चयनित ईओ यौगिकों के साथ उनकी प्रभावशीलता की तुलना करने के लिए विश्लेषण किया गया था।
प्रत्येक उम्मीदवार यौगिक की LC50 खुराक को 1:1 के अनुपात में मिलाकर चयनित टेरपीन यौगिकों और टेरपीन यौगिकों के साथ-साथ वाणिज्यिक ऑर्गनोफॉस्फेट (टाइलफोस और मैलाथियान) का द्विआधारी मिश्रण तैयार किया गया था।जैसा कि ऊपर वर्णित है, तैयार संयोजनों का एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर परीक्षण किया गया था।प्रत्येक बायोएसे को प्रत्येक संयोजन के लिए तीन प्रतियों में और प्रत्येक संयोजन में मौजूद व्यक्तिगत यौगिकों के लिए तीन प्रतियों में किया गया था।लक्षित कीड़ों की मृत्यु 24 घंटे के बाद दर्ज की गई।निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके बाइनरी मिश्रण के लिए अपेक्षित मृत्यु दर की गणना करें।
जहां ई = बाइनरी संयोजन, यानी कनेक्शन (ए + बी) के जवाब में एडीज एजिप्टी मच्छरों की अपेक्षित मृत्यु दर।
Pavla52 द्वारा वर्णित विधि द्वारा गणना किए गए χ2 मान के आधार पर प्रत्येक बाइनरी मिश्रण के प्रभाव को सहक्रियात्मक, विरोधी, या कोई प्रभाव नहीं के रूप में लेबल किया गया था।निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके प्रत्येक संयोजन के लिए χ2 मान की गणना करें।
संयोजन के प्रभाव को सहक्रियात्मक के रूप में परिभाषित किया गया था जब गणना की गई χ2 मान स्वतंत्रता की संबंधित डिग्री (95% विश्वास अंतराल) के लिए तालिका मूल्य से अधिक थी और यदि देखी गई मृत्यु दर अपेक्षित मृत्यु दर से अधिक पाई गई थी।इसी तरह, यदि किसी भी संयोजन के लिए गणना की गई χ2 मान स्वतंत्रता की कुछ डिग्री के साथ तालिका मूल्य से अधिक है, लेकिन देखी गई मृत्यु दर अपेक्षित मृत्यु दर से कम है, तो उपचार को विरोधी माना जाता है।और यदि किसी संयोजन में χ2 का परिकलित मान स्वतंत्रता की संबंधित डिग्री में तालिका मान से कम है, तो संयोजन का कोई प्रभाव नहीं माना जाता है।
बड़ी संख्या में कीड़ों के खिलाफ परीक्षण के लिए तीन से चार संभावित सहक्रियात्मक संयोजन (100 लार्वा और 50 लार्विसाइडल और वयस्क कीट गतिविधि) का चयन किया गया था।वयस्क) ऊपर बताए अनुसार आगे बढ़ें।मिश्रण के साथ-साथ, चयनित मिश्रण में मौजूद व्यक्तिगत यौगिकों का भी एडीज एजिप्टी लार्वा और वयस्कों की समान संख्या पर परीक्षण किया गया था।संयोजन अनुपात एक उम्मीदवार यौगिक की एक भाग LC50 खुराक और दूसरे घटक यौगिक की एक भाग LC50 खुराक है।वयस्क गतिविधि बायोसे में, चयनित यौगिकों को विलायक एसीटोन में भंग कर दिया गया और 1300 सेमी 3 बेलनाकार प्लास्टिक कंटेनर में लपेटे गए फिल्टर पेपर पर लगाया गया।एसीटोन को 10 मिनट तक वाष्पित किया गया और वयस्कों को छोड़ दिया गया।इसी तरह, लार्विसाइडल बायोएसे में, एलसी 50 उम्मीदवार यौगिकों की खुराक को पहले डीएमएसओ की समान मात्रा में भंग कर दिया गया और फिर 1300 सीसी प्लास्टिक कंटेनर में संग्रहीत 1 लीटर पानी के साथ मिलाया गया, और लार्वा को छोड़ दिया गया।
एलसी50 मूल्यों की गणना के लिए एसपीएसएस (संस्करण 16) और मिनिटैब सॉफ्टवेयर का उपयोग करके 71 दर्ज मृत्यु दर डेटा का संभाव्य विश्लेषण किया गया था।