एडीज एजिप्टी (डिप्टेरा: कुलिसिडे) के विरुद्ध लार्वानाशक और वयस्क उपचार के रूप में पौधों के आवश्यक तेलों पर आधारित टेरपीन यौगिकों का संयोजन

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पौधों से प्राप्त कीटनाशक यौगिकों के संयोजन कीटों के विरुद्ध सहक्रियात्मक या विरोधी अंतःक्रिया प्रदर्शित कर सकते हैं। एडीज मच्छरों द्वारा फैलाई जाने वाली बीमारियों के तेजी से फैलने और पारंपरिक कीटनाशकों के प्रति एडीज मच्छरों की आबादी के बढ़ते प्रतिरोध को देखते हुए, पौधों के आवश्यक तेलों पर आधारित टेरपीन यौगिकों के अट्ठाईस संयोजनों को तैयार किया गया और एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों के विरुद्ध उनका परीक्षण किया गया। पांच पौधों के आवश्यक तेलों (ईओ) का आरंभ में उनके लार्वानाशक और वयस्क-उपयोग प्रभावकारिता के लिए मूल्यांकन किया गया और जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख यौगिकों की पहचान की गई। पहचाने गए मुख्य यौगिकों को खरीदा गया, अर्थात् डायलिल डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, कार्वोन, लिमोनेन, यूजेनॉल, मिथाइल यूजेनॉल, युकेलिप्टोल, यूडेसमोल और मच्छर अल्फा-पिनीन। इन यौगिकों के बाइनरी संयोजनों को तब उप-घातक खुराकों का उपयोग करके तैयार किया गया और उनके सहक्रियात्मक और विरोधी प्रभावों का परीक्षण और निर्धारण किया गया। सर्वोत्तम लार्विसाइडल रचनाएँ लिमोनीन को डायलिल डाइसल्फ़ाइड के साथ मिलाकर प्राप्त की जाती हैं, तथा सर्वोत्तम वयस्कनाशक रचनाएँ कार्वोन को लिमोनीन के साथ मिलाकर प्राप्त की जाती हैं। व्यावसायिक रूप से उपयोग किए जाने वाले सिंथेटिक लार्विसाइड टेम्पोस और वयस्क दवा मैलाथियान का अलग-अलग और टेरपेनोइड्स के साथ बाइनरी संयोजनों में परीक्षण किया गया। परिणामों से पता चला कि टेमेफोस और डायलिल डाइसल्फ़ाइड तथा मैलाथियान और यूडेसमोल का संयोजन सबसे प्रभावी संयोजन था। ये शक्तिशाली संयोजन एडीज एजिप्टी के विरुद्ध उपयोग की क्षमता रखते हैं।
पौधों के आवश्यक तेल (ईओ) द्वितीयक मेटाबोलाइट हैं जिनमें विभिन्न जैवसक्रिय यौगिक होते हैं और सिंथेटिक कीटनाशकों के विकल्प के रूप में इनका महत्व लगातार बढ़ता जा रहा है। न केवल वे पर्यावरण के अनुकूल और उपयोगकर्ता के अनुकूल हैं, बल्कि वे विभिन्न जैवसक्रिय यौगिकों का मिश्रण भी हैं, जो दवा प्रतिरोध विकसित होने की संभावना को भी कम करता है1। जीसी-एमएस प्रौद्योगिकी का उपयोग करते हुए, शोधकर्ताओं ने विभिन्न पौधों के आवश्यक तेलों के घटकों की जांच की और 17,500 सुगंधित पौधों2 से 3,000 से अधिक यौगिकों की पहचान की, जिनमें से अधिकांश का कीटनाशक गुणों के लिए परीक्षण किया गया और बताया गया कि उनमें कीटनाशक प्रभाव हैं3,4। कुछ अध्ययनों में इस बात पर प्रकाश डाला गया है कि यौगिक के मुख्य घटक की विषाक्तता उसके कच्चे एथिलीन ऑक्साइड के समान या उससे अधिक है। लेकिन व्यक्तिगत यौगिकों के उपयोग से फिर से प्रतिरोध के विकास की गुंजाइश रह सकती है, जैसा कि रासायनिक कीटनाशकों5,6 के मामले में होता है। इसलिए, वर्तमान फोकस कीटनाशक प्रभावशीलता में सुधार करने और लक्षित कीट आबादी में प्रतिरोध की संभावना को कम करने के लिए एथिलीन ऑक्साइड-आधारित यौगिकों के मिश्रण तैयार करने पर है। ईओ में मौजूद अलग-अलग सक्रिय यौगिक ईओ की समग्र गतिविधि को दर्शाते हुए संयोजनों में सहक्रियात्मक या विरोधी प्रभाव प्रदर्शित कर सकते हैं, एक तथ्य जिस पर पिछले शोधकर्ताओं द्वारा किए गए अध्ययनों में अच्छी तरह से जोर दिया गया है7,8। वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम में ईओ और उसके घटक भी शामिल हैं। आवश्यक तेलों की मच्छरनाशक गतिविधि का क्यूलेक्स और एनोफिलीज मच्छरों पर बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है। कई अध्ययनों ने समग्र विषाक्तता को बढ़ाने और दुष्प्रभावों को कम करने के लिए विभिन्न पौधों को व्यावसायिक रूप से उपयोग किए जाने वाले सिंथेटिक कीटनाशकों के साथ मिलाकर प्रभावी कीटनाशक विकसित करने का प्रयास किया है9। लेकिन एडीज एजिप्टी के खिलाफ ऐसे यौगिकों के अध्ययन दुर्लभ हैं। चिकित्सा विज्ञान में प्रगति और दवाओं और टीकों के विकास ने कुछ वेक्टर जनित रोगों से निपटने में मदद की है। लेकिन एडीज एजिप्टी मच्छर द्वारा प्रसारित वायरस के विभिन्न सीरोटाइप की उपस्थिति ने टीकाकरण कार्यक्रमों की विफलता को जन्म दिया है। इसलिए, जब ऐसी बीमारियाँ होती हैं, तो बीमारी के प्रसार को रोकने के लिए वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम ही एकमात्र विकल्प होते हैं। वर्तमान परिदृश्य में, एडीज एजिप्टी पर नियंत्रण बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि यह डेंगू बुखार, जीका, डेंगू रक्तस्रावी बुखार, पीत ज्वर आदि का कारण बनने वाले विभिन्न वायरस और उनके सीरोटाइप का प्रमुख वेक्टर है। सबसे उल्लेखनीय बात यह है कि लगभग सभी वेक्टर जनित एडीज जनित रोगों के मामलों की संख्या हर साल मिस्र में और दुनिया भर में बढ़ रही है। इसलिए, इस संदर्भ में, एडीज एजिप्टी आबादी के लिए पर्यावरण के अनुकूल और प्रभावी नियंत्रण उपायों को विकसित करने की तत्काल आवश्यकता है। इस संबंध में संभावित उम्मीदवार ईओ, उनके घटक यौगिक और उनके संयोजन हैं। इसलिए, इस अध्ययन में एडीज एजिप्टी के खिलाफ कीटनाशक गुणों वाले पांच पौधों (यानी, पुदीना, पवित्र तुलसी, नीलगिरी स्पॉटेड, एलियम सल्फर और मेलालेउका) से प्रमुख प्लांट ईओ यौगिकों के प्रभावी सहक्रियात्मक संयोजनों की पहचान करने का प्रयास किया गया।
सभी चयनित ईओ ने एडीज एजिप्टी के खिलाफ संभावित लार्विसाइडल गतिविधि का प्रदर्शन किया, जिसमें 24 घंटे का एलसी50 0.42 से 163.65 पीपीएम तक था। सबसे अधिक लार्विसाइडल गतिविधि पेपरमिंट (एमपी) ईओ के लिए दर्ज की गई थी, जिसका एलसी50 मान 24 घंटे पर 0.42 पीपीएम था, उसके बाद लहसुन (एएस) का स्थान था, जिसका एलसी50 मान 24 घंटे पर 16.19 पीपीएम था (तालिका 1)।
ओसीमम सेंटम, ओएस ईओ के अपवाद के साथ, अन्य सभी चार स्क्रीन किए गए ईओ ने स्पष्ट एलर्जिक प्रभाव दिखाए, जिसमें 24 घंटे के एक्सपोजर अवधि में एलसी50 मान 23.37 से 120.16 पीपीएम तक था। थाइमोफिलस स्ट्रिएटा (सीएल) ईओ एक्सपोजर के 24 घंटे के भीतर 23.37 पीपीएम के एलसी50 मान के साथ वयस्कों को मारने में सबसे प्रभावी था, इसके बाद यूकेलिप्टस मैक्युलाटा (ईएम) था जिसका एलसी50 मान 101.91 पीपीएम था (तालिका 1)। दूसरी ओर, ओएस के लिए एलसी50 मान अभी तक निर्धारित नहीं किया गया है क्योंकि उच्चतम खुराक पर 53% की उच्चतम मृत्यु दर दर्ज की गई थी (पूरक चित्र 3)।
प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख घटक यौगिकों की पहचान की गई और उन्हें एनआईएसटी लाइब्रेरी डेटाबेस परिणामों, जीसी क्रोमैटोग्राम क्षेत्र प्रतिशत और एमएस स्पेक्ट्रा परिणामों (तालिका 2) के आधार पर चुना गया। ईओ एएस के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड थे; ईओ एमपी के लिए पहचाने गए मुख्य यौगिक कार्वोन और लिमोनीन थे, ईओ ईएम के लिए पहचाने गए मुख्य यौगिक यूडेसमोल और यूकेलिप्टोल थे; ईओ ओएस के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक यूजेनॉल और मिथाइल यूजेनॉल थे, और ईओ सीएल के लिए, पहचाने गए मुख्य यौगिक यूजेनॉल और α-पिनीन थे (चित्र 1, पूरक चित्र 5-8, पूरक तालिका 1-5)।
चयनित आवश्यक तेलों (ए-डायलिल डाइसल्फ़ाइड; बी-डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड; सी-यूजेनॉल; डी-मिथाइल यूजेनॉल; ई-लिमोनीन; एफ-एरोमैटिक सेपरोन; जी-α-पिनीन; एच-सिनेओल; आर-यूडामोल) के मुख्य टेरपेनोइड्स के द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री के परिणाम।
कुल नौ यौगिकों (डायलिल डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, यूजेनॉल, मिथाइल यूजेनॉल, कार्वोन, लिमोनेन, युकलिप्टोल, यूडेसमॉल, α-पिनीन) को प्रभावी यौगिकों के रूप में पहचाना गया जो कि ईओ के मुख्य घटक हैं और लार्वा चरणों में एडीज एजिप्टी के खिलाफ व्यक्तिगत रूप से जैवपरीक्षण किए गए थे। यूडेसमॉल यौगिक में 24 घंटे के एक्सपोजर के बाद 2.25 पीपीएम के एलसी50 मूल्य के साथ उच्चतम लार्विसाइडल गतिविधि थी। डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड यौगिकों में भी संभावित लार्विसाइडल प्रभाव पाए गए हैं, जिनकी औसत उप-घातक खुराक 10-20 पीपीएम की सीमा में है। यूजेनॉल, लिमोनेन और युकलिप्टोल यौगिकों में 63.35 पीपीएम, 139.29 पीपीएम के एलसी50 मूल्यों के साथ मध्यम लार्विसाइडल गतिविधि फिर से देखी गई। और 24 घंटे के बाद क्रमशः 181.33 पीपीएम (तालिका 3)। हालांकि, उच्चतम खुराक पर भी मिथाइल यूजेनॉल और कार्वोन की कोई महत्वपूर्ण लार्विसाइडल क्षमता नहीं पाई गई, इसलिए LC50 मानों की गणना नहीं की गई (तालिका 3)। सिंथेटिक लार्विसाइड टेमेफोस में एडीज एजिप्टी के खिलाफ 24 घंटे के एक्सपोजर के दौरान 0.43 पीपीएम की औसत घातक सांद्रता थी (तालिका 3, पूरक तालिका 6)।
सात यौगिकों (डायलिल डाइसल्फ़ाइड, डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड, युकेलिप्टोल, α-पिनीन, यूडेसमोल, लिमोनेन और कार्वोन) को प्रभावी ईओ के मुख्य यौगिकों के रूप में पहचाना गया और वयस्क मिस्र के एडीज़ मच्छरों के खिलाफ़ व्यक्तिगत रूप से परीक्षण किया गया। प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण के अनुसार, यूडेसमोल में 1.82 पीपीएम के एलसी50 मूल्य के साथ सबसे अधिक क्षमता पाई गई, उसके बाद 24 घंटे के एक्सपोजर समय पर 17.60 पीपीएम के एलसी50 मूल्य के साथ युकेलिप्टोल का स्थान रहा। परीक्षण किए गए शेष पांच यौगिक वयस्कों के लिए मध्यम रूप से हानिकारक थे, जिनका एलसी50 140.79 से 737.01 पीपीएम (तालिका 3) के बीच था। सिंथेटिक ऑर्गेनोफॉस्फोरस मैलाथियान यूडेसमोल की तुलना में कम शक्तिशाली था और अन्य छह यौगिकों की तुलना में अधिक था, जिसका 24 घंटे के एक्सपोजर अवधि में एलसी50 मूल्य 5.44 पीपीएम था (तालिका 3, अनुपूरक तालिका 6)।
सात शक्तिशाली लीड यौगिकों और ऑर्गेनोफॉस्फोरस टेमेफोसेट को 1:1 अनुपात में उनकी LC50 खुराकों के बाइनरी संयोजनों को तैयार करने के लिए चुना गया था। कुल 28 बाइनरी संयोजन तैयार किए गए और एडीज एजिप्टी के खिलाफ उनकी लार्वीसाइडल प्रभावकारिता के लिए उनका परीक्षण किया गया। नौ संयोजन सहक्रियात्मक पाए गए, 14 संयोजन विरोधी थे, और पांच संयोजन लार्वीसाइडल नहीं थे। सहक्रियात्मक संयोजनों में, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और टेमोफ़ोल का संयोजन सबसे प्रभावी था, जिसमें 24 घंटे के बाद 100% मृत्यु दर देखी गई (तालिका 4)। इसी तरह, डायलिल डाइसल्फ़ाइड के साथ लिमोनीन और थाइमेटफ़ोस के साथ यूजेनॉल के मिश्रण ने 98.3% की देखी गई लार्वा मृत्यु दर के साथ अच्छी क्षमता दिखाई (तालिका 5)। शेष 4 संयोजनों, अर्थात् यूडेसमोल प्लस युकेलिप्टोल, यूडेसमोल प्लस लिमोनीन, युकेलिप्टोल प्लस अल्फा-पिनीन, अल्फा-पिनीन प्लस टेमेफोस ने भी महत्वपूर्ण लार्विसाइडल प्रभावकारिता दिखाई, जिसमें मृत्यु दर 90% से अधिक देखी गई। अपेक्षित मृत्यु दर 60-75% के करीब है। (तालिका 4)। हालांकि, α-पिनीन या युकेलिप्टस के साथ लिमोनीन के संयोजन ने विरोधी प्रतिक्रियाएं दिखाईं। इसी तरह, टेमेफोस के यूजेनॉल या युकेलिप्टस या यूडेसमोल या डायलिल ट्राइसल्फाइड के साथ मिश्रण में विरोधी प्रभाव पाए गए हैं। इसी तरह, डायलिल डाइसल्फाइड और डायलिल ट्राइसल्फाइड का संयोजन और इनमें से किसी भी यौगिक का यूडेसमोल या यूजेनॉल के साथ संयोजन उनकी लार्विसाइडल क्रिया में विरोधी हैं। यूडेसमोल के साथ यूजेनॉल या α-पिनीन के संयोजन से भी विरोध की सूचना मिली है।
वयस्क अम्लीय गतिविधि के लिए परीक्षण किए गए सभी 28 बाइनरी मिश्रणों में से, 7 संयोजन सहक्रियात्मक थे, 6 का कोई प्रभाव नहीं था, और 15 विरोधी थे। युकेलिप्टस के साथ यूडेसमोल और कार्वोन के साथ लिमोनीन का मिश्रण अन्य सहक्रियात्मक संयोजनों की तुलना में अधिक प्रभावी पाया गया, जिसमें 24 घंटे में मृत्यु दर क्रमशः 76% और 100% थी (तालिका 5)। मैलाथियान को लिमोनीन और डायलिल ट्राइसल्फाइड को छोड़कर यौगिकों के सभी संयोजनों के साथ सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित करते हुए देखा गया है। दूसरी ओर, डायलिल डाइसल्फाइड और डायलिल ट्राइसल्फाइड और उनमें से किसी एक के युकेलिप्टस, या युकेलिप्टोल, या कार्वोन, या लिमोनीन के साथ संयोजन के बीच विरोध पाया गया है। इसी तरह, α-पिनीन के साथ यूडेसमोल या लिमोनीन, युकेलिप्टोल के साथ कार्वोन या लिमोनीन, और लिमोनीन के साथ यूडेसमोल या मैलाथियान के संयोजनों ने विरोधी लार्विसाइडल प्रभाव दिखाए। शेष छह संयोजनों के लिए, अपेक्षित और देखी गई मृत्यु दर के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था (तालिका 5)।
सहक्रियात्मक प्रभावों और उप-घातक खुराक के आधार पर, अंततः बड़ी संख्या में एडीज एजिप्टी मच्छरों के खिलाफ उनकी लार्विसाइडल विषाक्तता का चयन किया गया और आगे का परीक्षण किया गया। परिणामों से पता चला कि यूजेनॉल-लिमोनेन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड-लिमोनेन और डायलिल डाइसल्फ़ाइड-टाइमफ़ोस के बाइनरी संयोजनों का उपयोग करते हुए देखी गई लार्वा मृत्यु दर 100% थी, जबकि अपेक्षित लार्वा मृत्यु दर क्रमशः 76.48%, 72.16% और 63.4% थी (तालिका 6)। लिमोनेन और यूडेसमॉल का संयोजन अपेक्षाकृत कम प्रभावी था, 24 घंटे के संपर्क अवधि में 88% लार्वा मृत्यु दर देखी गई (तालिका 6)। संक्षेप में, चार चयनित बाइनरी संयोजनों ने बड़े पैमाने पर लागू होने पर एडीज एजिप्टी के खिलाफ सहक्रियात्मक लार्विसाइडल प्रभावों का भी प्रदर्शन किया (तालिका 6)।
वयस्क एडीज एजिप्टी की बड़ी आबादी को नियंत्रित करने के लिए वयस्कनाशक जैव परख के लिए तीन सहक्रियात्मक संयोजनों का चयन किया गया था। बड़ी कीट कॉलोनियों पर परीक्षण करने के लिए संयोजनों का चयन करने हेतु, हमने सबसे पहले दो सर्वोत्तम सहक्रियात्मक टेरपीन संयोजनों पर ध्यान केंद्रित किया, अर्थात् कार्वोन प्लस लिमोनेन और युकलिप्टोल प्लस यूडेसमोल। दूसरे, सर्वोत्तम सहक्रियात्मक संयोजन को सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट मैलाथियान और टेरपेनोइड्स के संयोजन से चुना गया था। हमारा मानना ​​है कि मैलाथियान और यूडेसमोल का संयोजन सबसे अधिक देखी गई मृत्यु दर और उम्मीदवार अवयवों के बहुत कम LC50 मूल्यों के कारण बड़ी कीट कॉलोनियों पर परीक्षण के लिए सबसे अच्छा संयोजन है। मैलाथियान α-पिनीन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड, युकलिप्टस, कार्वोन और यूडेसमोल के साथ संयोजन में सहक्रियाशीलता प्रदर्शित करता है मैलाथियान, α-पिनीन, डायलिल डाइसल्फ़ाइड, युकलिप्टोल और कार्वोन के गणना किए गए LC50 मान क्रमशः 5.4, 716.55, 166.02, 17.6 और 140.79 पीपीएम थे। ये मान दर्शाते हैं कि मैलाथियान और यूडेसमोल का संयोजन खुराक के मामले में इष्टतम संयोजन है। परिणामों से पता चला कि कार्वोन प्लस लिमोनेन और यूडेसमोल प्लस मैलाथियान के संयोजनों में 61% से 65% की अपेक्षित मृत्यु दर की तुलना में 100% मृत्यु दर देखी गई। एक अन्य संयोजन, यूडेसमोल प्लस युकलिप्टोल ने 60% की अपेक्षित मृत्यु दर की तुलना में, 24 घंटे के संपर्क के बाद 78.66% की मृत्यु दर दिखाई।
इस अध्ययन में, चयनित पादप EOs जैसे Mp, As, Os, Em और Cl ने एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर आशाजनक घातक प्रभाव दिखाए। Mp EO में 0.42 ppm के LC50 मान के साथ सबसे अधिक लार्विसाइडल गतिविधि थी, उसके बाद As, Os और Em EOs थे जिनका LC50 मान 24 घंटे के बाद 50 ppm से कम था। ये परिणाम मच्छरों और अन्य डिप्टरस मक्खियों के पिछले अध्ययनों के अनुरूप हैं10,11,12,13,14। हालाँकि Cl की लार्विसाइडल क्षमता अन्य आवश्यक तेलों की तुलना में कम है, जिसका LC50 मान 24 घंटे के बाद 163.65 ppm है, लेकिन इसकी वयस्क क्षमता 24 घंटे के बाद LC50 मान 23.37 ppm के साथ सबसे अधिक है। एमपी, एएस और ईएम ईओ ने 24 घंटे के एक्सपोजर पर 100-120 पीपीएम की सीमा में एलसी50 मूल्यों के साथ अच्छी एलर्जीनाशक क्षमता भी दिखाई, लेकिन उनकी लार्विसाइडल प्रभावकारिता की तुलना में अपेक्षाकृत कम थी। दूसरी ओर, ईओ ओएस ने उच्चतम चिकित्सीय खुराक पर भी नगण्य एलर्जीनाशक प्रभाव प्रदर्शित किया। इस प्रकार, परिणाम संकेत देते हैं कि पौधों के लिए एथिलीन ऑक्साइड की विषाक्तता मच्छरों के विकासात्मक चरण15 के आधार पर भिन्न हो सकती है। यह कीट के शरीर में ईओ के प्रवेश की दर, विशिष्ट लक्ष्य एंजाइमों के साथ उनकी बातचीत और प्रत्येक विकासात्मक चरण16 में मच्छर की विषहरण क्षमता पर भी निर्भर करता है। बड़ी संख्या में अध्ययनों से पता चला है कि मुख्य घटक यौगिक एथिलीन ऑक्साइड की जैविक गतिविधि में एक महत्वपूर्ण कारक है, क्योंकि यह कुल यौगिकों3,12,17,18 के बहुमत के लिए जिम्मेदार है। इसलिए, हमने प्रत्येक ईओ में दो मुख्य यौगिकों पर विचार किया। जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड को ईओ एएस के प्रमुख यौगिकों के रूप में पहचाना गया, जो पिछली रिपोर्टों19,20,21 के अनुरूप है। हालाँकि पिछली रिपोर्टों ने संकेत दिया था कि मेन्थॉल इसके मुख्य यौगिकों में से एक था, कार्वोन और लिमोनेन को फिर से एमपी ईओ22,23 के मुख्य यौगिकों के रूप में पहचाना गया। ओएस ईओ की संरचना प्रोफ़ाइल ने दिखाया कि यूजेनॉल और मिथाइल यूजेनॉल मुख्य यौगिक हैं, जो पहले के शोधकर्ताओं16,24 के निष्कर्षों के समान है। यूकेलिप्टोल और युकलिप्टोल को एम लीफ ऑयल में मौजूद मुख्य यौगिकों के रूप में बताया गया है, जो कुछ शोधकर्ताओं25,26 के निष्कर्षों के अनुरूप है लेकिन ओलाडे एट अल.27 के निष्कर्षों के विपरीत है। मेलालेउका आवश्यक तेल में सिनेओल और α-पिनीन का प्रभुत्व देखा गया, जो पिछले अध्ययनों28,29 के समान है। अलग-अलग स्थानों में एक ही पौधे की प्रजाति से निकाले गए आवश्यक तेलों की संरचना और सांद्रता में अंतर-विशिष्ट अंतर बताए गए हैं और इस अध्ययन में भी देखे गए हैं, जो भौगोलिक पौधों की वृद्धि की स्थिति, कटाई के समय, विकासात्मक चरण या पौधे की उम्र से प्रभावित होते हैं। कीमोटाइप्स का दिखना, आदि।22,30,31,32. फिर पहचाने गए प्रमुख यौगिकों को खरीदा गया और उनके लार्विसाइडल प्रभावों और वयस्क एडीज एजिप्टी मच्छरों पर प्रभावों के लिए परीक्षण किया गया। परिणामों से पता चला कि डायलिल डाइसल्फ़ाइड की लार्विसाइडल गतिविधि कच्चे ईओ अस के बराबर थी। लेकिन डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड की गतिविधि ईओ अस से अधिक है। ये परिणाम किम्बारिस एट अल द्वारा प्राप्त परिणामों के समान हैं। 33 क्यूलेक्स फिलीपींस पर। ओएस ईओ एडीज एजिप्टी के लार्वा चरण के खिलाफ प्रभावी है, लेकिन वयस्क चरण के खिलाफ नहीं। यह स्थापित किया गया है कि मुख्य व्यक्तिगत यौगिकों की लार्वीसाइडल गतिविधि कच्चे ओएस ईओ की तुलना में कम है। यह अन्य यौगिकों और कच्चे एथिलीन ऑक्साइड में उनकी परस्पर क्रियाओं की भूमिका को दर्शाता है। अकेले मिथाइल यूजेनॉल की गतिविधि नगण्य है, जबकि अकेले यूजेनॉल की लार्वीसाइडल गतिविधि मध्यम है। यह निष्कर्ष एक ओर,35,36 की पुष्टि करता है, और दूसरी ओर, पहले के शोधकर्ताओं के निष्कर्षों का खंडन करता है37,38। यूजेनॉल और मिथाइल यूजेनॉल के कार्यात्मक समूहों में अंतर के परिणामस्वरूप एक ही लक्ष्य कीट के लिए अलग-अलग विषाक्तता हो सकती है39। लिमोनीन में मध्यम लार्वीसाइडल गतिविधि पाई गई, जबकि कार्वोन का प्रभाव नगण्य था। इसी तरह, वयस्क कीटों के लिए लिमोनीन की अपेक्षाकृत कम विषाक्तता और कार्वोन की उच्च विषाक्तता कुछ पिछले अध्ययनों के परिणामों का समर्थन करती है40 लेकिन दूसरों का खंडन करती है41। इंट्रासाइक्लिक और एक्सोसाइक्लिक दोनों स्थितियों में दोहरे बॉन्ड की मौजूदगी लार्विसाइड्स3,41 के रूप में इन यौगिकों के लाभों को बढ़ा सकती है, जबकि कार्वोन, जो असंतृप्त अल्फा और बीटा कार्बन वाला कीटोन है, वयस्कों में विषाक्तता की उच्च क्षमता प्रदर्शित कर सकता है42। हालांकि, लिमोनेन और कार्वोन की व्यक्तिगत विशेषताएं कुल ईओ एमपी (तालिका 1, तालिका 3) की तुलना में बहुत कम हैं। परीक्षण किए गए टेरपेनोइड्स में, यूडेसमोल में सबसे अधिक लार्विसाइडल और वयस्क गतिविधि पाई गई, जिसका एलसी50 मान 2.5 पीपीएम से कम था, जो इसे एडीज मच्छरों के नियंत्रण के लिए एक आशाजनक यौगिक बनाता है। इसका प्रदर्शन पूरे ईओ ईएम से बेहतर है, हालांकि यह चेंग एट अल.40 के निष्कर्षों के अनुरूप नहीं है। यूडेसमोल दो आइसोप्रीन इकाइयों वाला सेस्क्यूटरपीन है युकेलिप्टोल में लार्वीसाइडल क्रियाकलाप की तुलना में वयस्क क्रियाकलाप अधिक होते हैं, तथा पहले के अध्ययनों के परिणाम इसका समर्थन और खंडन दोनों करते हैं37,43,44। अकेले क्रियाकलाप लगभग पूरे EO Cl के बराबर है। एक अन्य बाइसाइक्लिक मोनोटेरपेन, α-पिनीन, एडीज एजिप्टी पर लार्वीसाइडल प्रभाव की तुलना में वयस्क प्रभाव कम होता है, जो पूर्ण EO Cl के प्रभाव के विपरीत होता है। टेरपेनोइड्स की समग्र कीटनाशक क्रियाकलाप उनकी लिपोफिलिसिटी, अस्थिरता, कार्बन ब्रांचिंग, प्रक्षेपण क्षेत्र, सतह क्षेत्र, कार्यात्मक समूहों और उनकी स्थिति45,46 से प्रभावित होती है। ये यौगिक कोशिका संचय को नष्ट करके, श्वसन क्रियाकलाप को अवरुद्ध करके, तंत्रिका आवेगों के संचरण को बाधित करके, आदि कार्य कर सकते हैं। 47 सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट टेमेफोस में 0.43 पीपीएम के LC50 मान के साथ सबसे अधिक लार्वीसाइडल क्रियाकलाप पाया गया, जो लेक के डेटा -उटाला48 के अनुरूप है। सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फोरस मैलाथियान की वयस्क गतिविधि 5.44 पीपीएम बताई गई। हालाँकि इन दो ऑर्गनोफॉस्फेट ने एडीज एजिप्टी के प्रयोगशाला उपभेदों के खिलाफ अनुकूल प्रतिक्रियाएँ दिखाई हैं, लेकिन दुनिया के विभिन्न हिस्सों में इन यौगिकों के लिए मच्छरों के प्रतिरोध की रिपोर्ट की गई है49। हालाँकि, हर्बल दवाओं के प्रति प्रतिरोध के विकास की कोई समान रिपोर्ट नहीं मिली है50। इस प्रकार, वनस्पति को वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रमों में रासायनिक कीटनाशकों के संभावित विकल्प के रूप में माना जाता है।
लार्विसाइडल प्रभाव का परीक्षण 28 बाइनरी संयोजनों (1:1) पर किया गया, जो शक्तिशाली टेरपेनोइड्स और थाइमेटफोस के साथ टेरपेनोइड्स से तैयार किए गए थे, और 9 संयोजन सहक्रियात्मक, 14 विरोधी और 5 विरोधी पाए गए। कोई प्रभाव नहीं। दूसरी ओर, वयस्क शक्ति जैव परख में, 7 संयोजन सहक्रियात्मक पाए गए, 15 संयोजन विरोधी थे, और 6 संयोजनों का कोई प्रभाव नहीं होने की सूचना मिली। कुछ संयोजनों द्वारा सहक्रियात्मक प्रभाव उत्पन्न करने का कारण उम्मीदवार यौगिकों का विभिन्न महत्वपूर्ण मार्गों में एक साथ परस्पर क्रिया करना, या किसी विशेष जैविक मार्ग के विभिन्न प्रमुख एंजाइमों का क्रमिक अवरोध हो सकता है51। डायलिल डाइसल्फ़ाइड, युकलिप्टस या यूजेनॉल के साथ लिमोनीन का संयोजन छोटे और बड़े पैमाने पर दोनों अनुप्रयोगों में सहक्रियात्मक पाया गया (तालिका 6), जबकि युकलिप्टस या α-पिनीन के साथ इसका संयोजन लार्वा पर विरोधी प्रभाव डालता पाया गया। औसतन, लिमोनीन एक अच्छा सहक्रियात्मक प्रतीत होता है, संभवतः मिथाइल समूहों की उपस्थिति, स्ट्रेटम कॉर्नियम में अच्छी पैठ और क्रिया के एक अलग तंत्र52,53 के कारण। यह पहले बताया गया है कि लिमोनीन कीटों के क्यूटिकल (संपर्क विषाक्तता) में प्रवेश करके, पाचन तंत्र को प्रभावित करके (एंटीफीडेंट), या श्वसन तंत्र (धूमन गतिविधि) को प्रभावित करके विषाक्त प्रभाव पैदा कर सकता है, 54 जबकि यूजेनॉल जैसे फेनिलप्रोपेनोइड्स चयापचय एंजाइमों को प्रभावित कर सकते हैं 55। इसलिए, क्रिया के विभिन्न तंत्रों वाले यौगिकों के संयोजन मिश्रण के समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकते हैं। युकेलिप्टोल को डायलिल डाइसल्फ़ाइड, युकेलिप्टस या α-पिनीन के साथ सहक्रियात्मक पाया गया, लेकिन अन्य यौगिकों के साथ अन्य संयोजन या तो गैर-लार्विसाइडल या विरोधी थे। शुरुआती अध्ययनों से पता चला है कि युकेलिप्टोल में एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ (AChE), साथ ही ऑक्टामाइन और GABA रिसेप्टर्स56 पर निरोधात्मक गतिविधि है। चूँकि चक्रीय मोनोटेरपेन्स, युकेलिप्टोल, यूजेनॉल, आदि में उनकी न्यूरोटॉक्सिक गतिविधि के समान ही क्रियाविधि हो सकती है, 57 जिससे पारस्परिक अवरोध के माध्यम से उनके संयुक्त प्रभावों को कम किया जा सकता है। इसी तरह, टेमेफोस का डायलिल डाइसल्फ़ाइड, α-पिनीन और लिमोनीन के साथ संयोजन सहक्रियात्मक पाया गया, जो हर्बल उत्पादों और सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट58 के बीच सहक्रियात्मक प्रभाव की पिछली रिपोर्टों का समर्थन करता है।
यूडेसमोल और युकलिप्टोल के संयोजन का एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर एक सहक्रियात्मक प्रभाव पाया गया, जो संभवतः उनकी भिन्न रासायनिक संरचनाओं के कारण उनकी क्रिया के भिन्न तरीकों के कारण है। यूडेसमोल (एक सेस्क्यूटरपीन) श्वसन प्रणाली 59 को प्रभावित कर सकता है और युकलिप्टोल (एक मोनोटेरपीन) एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ 60 को प्रभावित कर सकता है। दो या अधिक लक्ष्य स्थलों पर अवयवों का एक साथ संपर्क संयोजन के समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकता है। वयस्क पदार्थ जैव-परख में, मैलाथियान को कार्वोन या युकलिप्टोल या युकलिप्टोल या डायलिल डाइसल्फ़ाइड या α-पिनीन के साथ सहक्रियात्मक पाया गया, जो दर्शाता है कि यह लिमोनेन और डाइ के योग के साथ सहक्रियात्मक है थांगम और कथिरेसन61 ने भी हर्बल अर्क के साथ मैलाथियान के सहक्रियात्मक प्रभाव के समान परिणामों की रिपोर्ट की। यह सहक्रियात्मक प्रतिक्रिया मैलाथियान और फाइटोकेमिकल्स के कीट विषहरण एंजाइमों पर संयुक्त विषाक्त प्रभावों के कारण हो सकती है। मैलाथियान जैसे ऑर्गनोफॉस्फेट आमतौर पर साइटोक्रोम P450 एस्टरेज और मोनोऑक्सीजिनेज62,63,64 को बाधित करके कार्य करते हैं। इसलिए, इन क्रियाविधि के साथ मैलाथियान और क्रियाविधि के विभिन्न तंत्रों के साथ टेरपेन्स का संयोजन मच्छरों पर समग्र घातक प्रभाव को बढ़ा सकता है।
दूसरी ओर, विरोध यह दर्शाता है कि चयनित यौगिक अकेले प्रत्येक यौगिक की तुलना में संयोजन में कम सक्रिय होते हैं। कुछ संयोजनों में विरोध का कारण यह हो सकता है कि एक यौगिक अवशोषण, वितरण, चयापचय, या उत्सर्जन की दर को बदलकर दूसरे यौगिक के व्यवहार को संशोधित करता है। शुरुआती शोधकर्ताओं ने इसे दवा संयोजनों में विरोध का कारण माना। अणु संभावित तंत्र 65. इसी तरह, विरोध के संभावित कारण कार्रवाई के समान तंत्र, समान रिसेप्टर या लक्ष्य साइट के लिए घटक यौगिकों की प्रतिस्पर्धा से संबंधित हो सकते हैं। कुछ मामलों में, लक्ष्य प्रोटीन का गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोध भी हो सकता है। इस अध्ययन में, दो ऑर्गेनोसल्फर यौगिकों, डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड ने विरोधी प्रभाव दिखाए, यूडेसमोल और अल्फा-पिनीन प्रकृति में चक्रीय हैं, जबकि डायलिल डाइसल्फ़ाइड और डायलिल ट्राइसल्फ़ाइड प्रकृति में एलिफैटिक हैं। रासायनिक संरचना के आधार पर, इन यौगिकों के संयोजन से समग्र घातक गतिविधि में वृद्धि होनी चाहिए क्योंकि उनके लक्ष्य स्थल आमतौर पर अलग-अलग होते हैं34,47, लेकिन प्रयोगात्मक रूप से हमने विरोध पाया, जो कि इन यौगिकों की भूमिका के कारण हो सकता है। इन यौगिकों में कुछ अज्ञात जीव प्रणालियों में परस्पर क्रिया के परिणामस्वरूप होता है। इसी तरह, सिनेओल और α-पिनीन के संयोजन ने विरोधी प्रतिक्रियाएँ उत्पन्न कीं, हालाँकि शोधकर्ताओं ने पहले बताया था कि दोनों यौगिकों के क्रिया के लक्ष्य अलग-अलग हैं47,60। चूँकि दोनों यौगिक चक्रीय मोनोटेरपेन हैं, इसलिए कुछ सामान्य लक्ष्य स्थल हो सकते हैं जो बंधन के लिए प्रतिस्पर्धा कर सकते हैं और अध्ययन किए गए संयोजन जोड़ों की समग्र विषाक्तता को प्रभावित कर सकते हैं।
LC50 मानों और देखी गई मृत्यु दर के आधार पर, दो सर्वश्रेष्ठ सहक्रियात्मक टेरपीन संयोजनों का चयन किया गया, अर्थात् कार्वोन + लिमोनेन और युकलिप्टोल + यूडेसमोल के जोड़े, साथ ही टेरपीन के साथ सिंथेटिक ऑर्गेनोफॉस्फोरस मैलाथियान। मैलाथियान + यूडेसमोल यौगिकों के इष्टतम सहक्रियात्मक संयोजन का परीक्षण एक वयस्क कीटनाशक जैव परख में किया गया था। यह पुष्टि करने के लिए कि क्या ये प्रभावी संयोजन अपेक्षाकृत बड़े जोखिम वाले स्थानों पर बड़ी संख्या में व्यक्तियों के खिलाफ काम कर सकते हैं, बड़ी कीट कॉलोनियों को लक्षित करें। ये सभी संयोजन कीटों के बड़े झुंडों के खिलाफ एक सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित करते हैं। एडीज एजिप्टी लार्वा की बड़ी आबादी के खिलाफ परीक्षण किए गए एक इष्टतम सहक्रियात्मक लार्विसाइडल संयोजन के लिए समान परिणाम प्राप्त हुए इसी तरह, सिंथेटिक लार्विसाइड्स या एडल्टसाइड्स के टेरपेन्स के साथ प्रभावी संयोजन का उपयोग मच्छरों को दिए जाने वाले थाइमेटफोस या मैलाथियान की खुराक को कम करने के लिए भी किया जा सकता है। ये शक्तिशाली सहक्रियात्मक संयोजन एडीज मच्छरों में दवा प्रतिरोध के विकास पर भविष्य के अध्ययनों के लिए समाधान प्रदान कर सकते हैं।
एडीज एजिप्टी के अंडे भारतीय आयुर्विज्ञान अनुसंधान परिषद के डिब्रूगढ़ स्थित क्षेत्रीय चिकित्सा अनुसंधान केंद्र से एकत्र किए गए और उन्हें गौहाटी विश्वविद्यालय के प्राणी विज्ञान विभाग में नियंत्रित तापमान (28 ± 1 °C) और आर्द्रता (85 ± 5%) पर निम्न स्थितियों में रखा गया: अरिवोली का वर्णन किया गया। अंडे सेने के बाद, लार्वा को लार्वा भोजन (कुत्ते के बिस्किट पाउडर और यीस्ट 3:1 अनुपात में) और वयस्कों को 10% ग्लूकोज घोल खिलाया गया। उभरने के तीसरे दिन से, वयस्क मादा मच्छरों को एल्बिनो चूहों का खून चूसने दिया गया। एक गिलास में पानी में फिल्टर पेपर भिगोएँ और इसे अंडे देने वाले पिंजरे में रखें।
चयनित पौधों के नमूने अर्थात् नीलगिरी के पत्ते (मायर्टेसी), पवित्र तुलसी (लैमियासी), पुदीना (लैमियासी), मेलालेका (मायर्टेसी) और एलियम बल्ब (अमरीलीडेसी)। गुवाहाटी से एकत्र किए गए और गुवाहाटी विश्वविद्यालय के वनस्पति विज्ञान विभाग द्वारा पहचाने गए। एकत्र किए गए पौधों के नमूनों (500 ग्राम) को 6 घंटे के लिए क्लेवेंजर उपकरण का उपयोग करके हाइड्रोडिस्टिलेशन के अधीन किया गया। निकाले गए ईओ को साफ कांच की शीशियों में एकत्र किया गया और आगे के अध्ययन के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया।
लार्विसाइडल विषाक्तता का अध्ययन थोड़ा संशोधित मानक विश्व स्वास्थ्य संगठन प्रक्रियाओं 67 का उपयोग करके किया गया था। एक पायसीकारक के रूप में डीएमएसओ का उपयोग करें। प्रत्येक ईओ सांद्रता का परीक्षण शुरू में 100 और 1000 पीपीएम पर किया गया था, प्रत्येक प्रतिकृति में 20 लार्वा को उजागर किया गया था। परिणामों के आधार पर, एक सांद्रता सीमा लागू की गई और मृत्यु दर 1 घंटे से 6 घंटे (1 घंटे के अंतराल पर) और उपचार के 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे बाद दर्ज की गई। सबलेटल सांद्रता (LC50) 24, 48 और 72 घंटे के एक्सपोजर के बाद निर्धारित की गई। प्रत्येक सांद्रता को एक नकारात्मक नियंत्रण (केवल पानी) और एक सकारात्मक नियंत्रण (DMSO-उपचारित पानी) के साथ तीन प्रतियों में परखा गया था।
रामर एट अल. 69 द्वारा वर्णित विधि का उपयोग एसीटोन को विलायक के रूप में उपयोग करते हुए एडीज एजिप्टी के खिलाफ वयस्क जैव परख के लिए किया गया था। प्रत्येक ईओ को प्रारंभ में 100 और 1000 पीपीएम की सांद्रता पर वयस्क एडीज एजिप्टी मच्छरों के खिलाफ परीक्षण किया गया था। प्रत्येक तैयार घोल के 2 मिली को व्हाटमैन नंबर पर लगाएं। फिल्टर पेपर का 1 टुकड़ा (आकार 12 x 15 सेमी2) और एसीटोन को 10 मिनट के लिए वाष्पित होने दें। केवल 2 मिली एसीटोन से उपचारित फिल्टर पेपर को नियंत्रण के रूप में उपयोग किया गया। एसीटोन के वाष्पित हो जाने के बाद, उपचारित फिल्टर पेपर और नियंत्रण फिल्टर पेपर को एक बेलनाकार ट्यूब (10 सेमी गहरी) में रखा जाता है मच्छर छोड़ने के 1 घंटे, 2 घंटे, 3 घंटे, 4 घंटे, 5 घंटे, 6 घंटे, 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे बाद मृत्यु दर दर्ज की गई। 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे के एक्सपोजर समय के लिए LC50 मान की गणना करें। यदि नियंत्रण समूह की मृत्यु दर 20% से अधिक है, तो पूरे परीक्षण को दोहराएं। इसी तरह, यदि नियंत्रण समूह में मृत्यु दर 5% से अधिक है, तो एबॉट के सूत्र68 का उपयोग करके उपचारित नमूनों के परिणामों को समायोजित करें।
चयनित आवश्यक तेलों के घटक यौगिकों का विश्लेषण करने के लिए गैस क्रोमैटोग्राफी (एगिलेंट 7890A) और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (Accu TOF GCv, Jeol) का प्रदर्शन किया गया। GC एक FID डिटेक्टर और एक केशिका स्तंभ (HP5-MS) से सुसज्जित था। वाहक गैस हीलियम थी, प्रवाह दर 1 मिली/मिनट थी। जीसी कार्यक्रम एलियम सैटिवम को 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M और ओसीमम सेंटम को 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 - 280 पर सेट करता है, पुदीना के लिए 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280, नीलगिरी के लिए 20.60-1M-10-200-3M-30-280, और लाल के लिए एक हजार परतों के लिए वे 10: 60-1M-8-220-5M-8-270-3M हैं।
प्रत्येक ईओ के प्रमुख यौगिकों की पहचान जीसी क्रोमैटोग्राम और मास स्पेक्ट्रोमेट्री परिणामों (एनआईएसटी 70 मानक डेटाबेस से संदर्भित) से गणना किए गए क्षेत्र प्रतिशत के आधार पर की गई थी।
प्रत्येक ईओ में दो प्रमुख यौगिकों का चयन जीसी-एमएस परिणामों के आधार पर किया गया था और आगे के बायोएसे के लिए 98-99% शुद्धता पर सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदा गया था। यौगिकों का परीक्षण ऊपर वर्णित अनुसार एडीज एजिप्टी के खिलाफ लार्वीसाइडल और वयस्क प्रभावकारिता के लिए किया गया था। सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले सिंथेटिक लार्वीसाइड्स टेमेफोसेट (सिग्मा एल्ड्रिच) और वयस्क दवा मैलाथियान (सिग्मा एल्ड्रिच) का विश्लेषण उसी प्रक्रिया का पालन करते हुए चयनित ईओ यौगिकों के साथ उनकी प्रभावशीलता की तुलना करने के लिए किया गया था।
चयनित टेरपीन यौगिकों और टेरपीन यौगिकों के साथ-साथ वाणिज्यिक ऑर्गनोफॉस्फेट (टाइलफॉस और मैलाथियान) के बाइनरी मिश्रण को प्रत्येक उम्मीदवार यौगिक की LC50 खुराक को 1:1 अनुपात में मिलाकर तैयार किया गया था। तैयार किए गए संयोजनों का परीक्षण ऊपर वर्णित अनुसार एडीज एजिप्टी के लार्वा और वयस्क चरणों पर किया गया था। प्रत्येक संयोजन के लिए प्रत्येक बायोएसे को तीन प्रतियों में और प्रत्येक संयोजन में मौजूद व्यक्तिगत यौगिकों के लिए तीन प्रतियों में किया गया था। लक्ष्य कीटों की मृत्यु 24 घंटे के बाद दर्ज की गई थी। निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके बाइनरी मिश्रण के लिए अपेक्षित मृत्यु दर की गणना करें।
जहाँ E = बाइनरी संयोजन, अर्थात कनेक्शन (A + B) की प्रतिक्रिया में एडीज़ एजिप्टी मच्छरों की अपेक्षित मृत्यु दर।
प्रत्येक बाइनरी मिश्रण के प्रभाव को पावला52 द्वारा वर्णित विधि द्वारा गणना किए गए χ2 मान के आधार पर सहक्रियात्मक, विरोधी या कोई प्रभाव नहीं के रूप में लेबल किया गया था। निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके प्रत्येक संयोजन के लिए χ2 मान की गणना करें।
किसी संयोजन के प्रभाव को सहक्रियात्मक के रूप में परिभाषित किया गया था जब गणना की गई χ2 मान स्वतंत्रता की संगत डिग्री (95% विश्वास अंतराल) के लिए तालिका मान से अधिक थी और यदि देखी गई मृत्यु दर अपेक्षित मृत्यु दर से अधिक पाई गई थी। इसी तरह, यदि किसी भी संयोजन के लिए गणना की गई χ2 मान स्वतंत्रता की कुछ डिग्री के साथ तालिका मान से अधिक है, लेकिन देखी गई मृत्यु दर अपेक्षित मृत्यु दर से कम है, तो उपचार को विरोधी माना जाता है। और अगर किसी भी संयोजन में χ2 का गणना किया गया मान स्वतंत्रता की संगत डिग्री में तालिका मान से कम है, तो संयोजन का कोई प्रभाव नहीं माना जाता है।
बड़ी संख्या में कीटों के खिलाफ परीक्षण के लिए तीन से चार संभावित सहक्रियात्मक संयोजनों (100 लार्वा और 50 लार्विसाइडल और वयस्क कीट गतिविधि) का चयन किया गया था। वयस्क) ऊपर बताए अनुसार आगे बढ़ें। मिश्रणों के साथ, चयनित मिश्रणों में मौजूद व्यक्तिगत यौगिकों का भी बराबर संख्या में एडीज एजिप्टी लार्वा और वयस्कों पर परीक्षण किया गया। संयोजन अनुपात एक उम्मीदवार यौगिक की एक भाग LC50 खुराक और अन्य घटक यौगिक की भाग LC50 खुराक है। वयस्क गतिविधि जैव परख में, चयनित यौगिकों को विलायक एसीटोन में घोला गया और 1300 सेमी3 बेलनाकार प्लास्टिक कंटेनर में लिपटे फिल्टर पेपर पर लगाया गया। एसीटोन को 10 मिनट तक वाष्पित किया गया और वयस्कों को छोड़ दिया गया।
LC50 मान की गणना के लिए SPSS (संस्करण 16) और मिनिटैब सॉफ्टवेयर का उपयोग करके 71 दर्ज मृत्यु दर आंकड़ों का संभाव्यता विश्लेषण किया गया।