मच्छरों के खिलाफ पर्यावरण के अनुकूल लार्वानाशक के रूप में गोभी के बीज के पाउडर और उसके यौगिकों की जैविक गतिविधि।

प्रभावी ढंग सेमच्छरों को नियंत्रित करेंऔर उनके द्वारा फैलाई जाने वाली बीमारियों की घटनाओं को कम करने के लिए, रासायनिक कीटनाशकों के रणनीतिक, टिकाऊ और पर्यावरण के अनुकूल विकल्पों की आवश्यकता है। हमने मिस्र के एडीज मच्छर (एल., 1762) के नियंत्रण में उपयोग के लिए जैविक रूप से निष्क्रिय ग्लूकोसिनोलेट्स के एंजाइमेटिक हाइड्रोलिसिस द्वारा उत्पादित पादप-व्युत्पन्न आइसोथियोसाइनेट के स्रोत के रूप में कुछ ब्रैसिकासी (परिवार ब्रैसिका) से प्राप्त बीज पाउडर का मूल्यांकन किया। पांच वसारहित बीज का चूर्ण (ब्रासिका जुनसिया (एल) चेर्न., 1859, लेपिडियम सैटिवम एल., 1753, सिनापिस अल्बा एल., 1753, थलास्पी आर्वेन्स एल., 1753 और थलास्पी आर्वेन्स - तीन मुख्य प्रकार के ऊष्मीय निष्क्रियता और एंजाइमेटिक अपघटन रासायनिक उत्पाद। एडीज एजिप्टी लार्वा पर एलिल आइसोथियोसाइनेट, बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट और 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइलिसोथियोसाइनेट की विषाक्तता (LC50) निर्धारित करने के लिए 24 घंटे के एक्सपोजर पर = 0.04 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O)। सरसों, सफेद सरसों और हॉर्सटेल के लिए LC50 मान। बीज के चूर्ण की सांद्रता क्रमशः 0.05, 0.08 और 0.05 थी, जबकि एलिल आइसोथियोसाइनेट (LC50 = 19.35 ppm) और 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइलिसोथियोसाइनेट (LC50 = 55.41 ppm) उपचार के 24 घंटे बाद लार्वा के लिए 0.1 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O की तुलना में अधिक विषैली थे। ये परिणाम अल्फाल्फा बीज के चूर्ण के उत्पादन के अनुरूप हैं। बेंजाइल एस्टर की उच्च दक्षता परिकलित LC50 मानों के अनुरूप है। बीज के चूर्ण का उपयोग मच्छरों को नियंत्रित करने का एक प्रभावी तरीका प्रदान कर सकता है। यह अध्ययन क्रूसिफेरस बीज के चूर्ण और इसके मुख्य रासायनिक घटकों की मच्छर लार्वा के विरुद्ध प्रभावशीलता को दर्शाता है और यह भी बताता है कि क्रूसिफेरस बीज के चूर्ण में मौजूद प्राकृतिक यौगिक मच्छरों को नियंत्रित करने के लिए एक आशाजनक पर्यावरण अनुकूल लार्वानाशक के रूप में कैसे काम कर सकते हैं।
एडीज मच्छरों से होने वाली वेक्टर-जनित बीमारियाँ वैश्विक स्तर पर एक बड़ी सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या बनी हुई हैं। मच्छर जनित बीमारियों का प्रसार भौगोलिक रूप से होता है1,2,3 और ये फिर से उभरती हैं, जिससे गंभीर बीमारियों का प्रकोप होता है4,5,6,7। मनुष्यों और जानवरों में बीमारियों का प्रसार (जैसे, चिकनगुनिया, डेंगू, रिफ्ट वैली फीवर, पीत ज्वर और ज़िका वायरस) अभूतपूर्व है। अकेले डेंगू बुखार से उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में लगभग 3.6 अरब लोग संक्रमण के खतरे में हैं, जहाँ प्रतिवर्ष अनुमानित 390 मिलियन संक्रमण होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप प्रति वर्ष 6,100-24,300 मौतें होती हैं8। दक्षिण अमेरिका में ज़िका वायरस के पुन: प्रकट होने और प्रकोप ने संक्रमित महिलाओं से पैदा हुए बच्चों में होने वाले मस्तिष्क क्षति के कारण विश्वव्यापी ध्यान आकर्षित किया है2। क्रेमर एट अल 3 का अनुमान है कि एडीज मच्छरों का भौगोलिक क्षेत्र बढ़ता रहेगा और 2050 तक, दुनिया की आधी आबादी मच्छर जनित आर्बोवायरस से संक्रमण के खतरे में होगी।
डेंगू और पीत ज्वर के खिलाफ हाल ही में विकसित टीकों को छोड़कर, अधिकांश मच्छर जनित रोगों के लिए टीके अभी तक विकसित नहीं किए गए हैं9,10,11। टीके अभी भी सीमित मात्रा में उपलब्ध हैं और केवल नैदानिक ​​परीक्षणों में ही उपयोग किए जाते हैं। मच्छर जनित रोगों के प्रसार को नियंत्रित करने के लिए सिंथेटिक कीटनाशकों का उपयोग करके मच्छर वाहकों का नियंत्रण एक प्रमुख रणनीति रही है12,13। हालांकि सिंथेटिक कीटनाशक मच्छरों को मारने में प्रभावी हैं, लेकिन इनका निरंतर उपयोग गैर-लक्षित जीवों को नकारात्मक रूप से प्रभावित करता है और पर्यावरण को प्रदूषित करता है14,15,16। इससे भी अधिक चिंताजनक बात यह है कि रासायनिक कीटनाशकों के प्रति मच्छरों में प्रतिरोधक क्षमता बढ़ रही है17,18,19। कीटनाशकों से जुड़ी इन समस्याओं ने रोग वाहकों को नियंत्रित करने के लिए प्रभावी और पर्यावरण के अनुकूल विकल्पों की खोज को गति दी है।
कीट नियंत्रण के लिए विभिन्न पौधों को फाइटोपेस्टीसाइड के स्रोत के रूप में विकसित किया गया है20,21। पादप पदार्थ आम तौर पर पर्यावरण के अनुकूल होते हैं क्योंकि वे जैवअपघटनीय होते हैं और स्तनधारियों, मछलियों और उभयचरों जैसे गैर-लक्षित जीवों के लिए कम या नगण्य विषाक्तता रखते हैं20,22। हर्बल तैयारियाँ विभिन्न क्रियाविधियों वाले कई जैवसक्रिय यौगिकों का उत्पादन करने के लिए जानी जाती हैं जो मच्छरों के विभिन्न जीवन चरणों को प्रभावी ढंग से नियंत्रित करते हैं23,24,25,26। आवश्यक तेलों और अन्य सक्रिय पादप अवयवों जैसे पादप-व्युत्पन्न यौगिकों ने ध्यान आकर्षित किया है और मच्छर वाहकों को नियंत्रित करने के लिए नवीन उपकरणों का मार्ग प्रशस्त किया है। आवश्यक तेल, मोनोतेरपेन्स और सेस्क्यूटरपेन्स विकर्षक, भोजन अवरोधक और अंडानाशक के रूप में कार्य करते हैं27,28,29,30,31,32,33। कई वनस्पति तेल मच्छर के लार्वा, प्यूपा और वयस्कों की मृत्यु का कारण बनते हैं34,35,36, जो कीड़ों के तंत्रिका, श्वसन, अंतःस्रावी और अन्य महत्वपूर्ण प्रणालियों को प्रभावित करते हैं37।
हाल के अध्ययनों ने सरसों के पौधों और उनके बीजों को जैवसक्रिय यौगिकों के स्रोत के रूप में संभावित उपयोग के बारे में जानकारी प्रदान की है। सरसों के बीज के चूर्ण का जैव-धुंधलाकारक38,39,40,41 के रूप में परीक्षण किया गया है और खरपतवार दमन42,43,44 तथा मृदा जनित पादप रोगजनकों45,46,47,48,49,50, पादप पोषण, नेमाटोड41,51, 52, 53, 54 तथा कीटों55, 56, 57, 58, 59, 60 के नियंत्रण हेतु मृदा संशोधक के रूप में उपयोग किया गया है। इन बीज चूर्णों की फफूंदनाशक गतिविधि का श्रेय आइसोथियोसाइनेट38,42,60 नामक पादप सुरक्षात्मक यौगिकों को दिया जाता है। पौधों में, ये सुरक्षात्मक यौगिक पादप कोशिकाओं में गैर-जैवसक्रिय ग्लूकोसिनोलेट्स के रूप में संग्रहित होते हैं। हालाँकि, जब पौधों को कीटों के खाने या रोगजनक संक्रमण से नुकसान होता है, तो ग्लूकोसिनोलेट्स को मायरोसिनेज़ द्वारा जैव-सक्रिय आइसोथियोसाइनेट्स में हाइड्रोलाइज़ किया जाता है55,61। आइसोथियोसाइनेट्स वाष्पशील यौगिक हैं जो व्यापक-स्पेक्ट्रम रोगाणुरोधी और कीटनाशक गतिविधि के लिए जाने जाते हैं, और उनकी संरचना, जैविक गतिविधि और सामग्री ब्रैसिकासी प्रजातियों के बीच व्यापक रूप से भिन्न होती है42,59,62,63।
हालांकि सरसों के बीज के चूर्ण से प्राप्त आइसोथियोसाइनेट में कीटनाशक गुण पाए जाते हैं, लेकिन चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण आर्थ्रोपोड वाहकों के विरुद्ध उनकी जैविक गतिविधि पर डेटा का अभाव है। हमारे अध्ययन में एडीज मच्छरों के लार्वा पर चार वसारहित बीज पाउडर की लार्वानाशक गतिविधि का परीक्षण किया गया। इस अध्ययन का उद्देश्य मच्छर नियंत्रण के लिए पर्यावरण के अनुकूल जैव कीटनाशकों के रूप में उनके संभावित उपयोग का मूल्यांकन करना था। बीज पाउडर के तीन प्रमुख रासायनिक घटकों, एलिल आइसोथियोसाइनेट (AITC), बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट (BITC) और 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइल आइसोथियोसाइनेट (4-HBITC) का भी मच्छर लार्वा पर जैविक गतिविधि का परीक्षण करने के लिए परीक्षण किया गया। यह मच्छर लार्वा के विरुद्ध चार गोभी के बीज पाउडर और उनके मुख्य रासायनिक घटकों की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने वाली पहली रिपोर्ट है।
एडीस एजिप्टी (रॉकफेलर स्ट्रेन) की प्रयोगशाला कॉलोनियों को 26°C तापमान, 70% सापेक्ष आर्द्रता (RH) और 10:14 घंटे (L:D फोटोपेरियोड) पर रखा गया था। संभोग कर चुकी मादाओं को प्लास्टिक के पिंजरों (ऊंचाई 11 सेमी और व्यास 9.5 सेमी) में रखा गया था और उन्हें साइट्रेटेड बोवाइन रक्त (हेमोस्टैट लेबोरेटरीज इंक., डिक्सन, कैलिफोर्निया, यूएसए) का उपयोग करके बोतल फीडिंग सिस्टम के माध्यम से रक्त पिलाया गया था। रक्त पिलाने की प्रक्रिया सामान्य रूप से एक झिल्लीदार मल्टी-ग्लास फीडर (केमग्लास, लाइफ साइंसेज एलएलसी, वाइनलैंड, न्यू जर्सी, यूएसए) का उपयोग करके की गई थी, जो 37°C तापमान नियंत्रण वाले एक परिसंचारी जल स्नान ट्यूब (HAAKE S7, थर्मो-साइंटिफिक, वाल्थम, मैसाचुसेट्स, यूएसए) से जुड़ा था। प्रत्येक कांच के फीडिंग चैंबर (क्षेत्रफल 154 मिमी²) के तल पर पैराफिल्म एम की एक परत बिछाई गई। फिर प्रत्येक फीडर को संभोग कर रही मादा वाले पिंजरे को ढकने वाली ऊपरी ग्रिड पर रखा गया। लगभग 350-400 μl गाय का रक्त एक कांच के फीडर फ़नल में पाश्चर पिपेट (फिशरब्रांड, फिशर साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके डाला गया और वयस्क कृमियों को कम से कम एक घंटे तक रिसने दिया गया। गर्भवती मादाओं को 10% सुक्रोज का घोल दिया गया और उन्हें अलग-अलग अल्ट्रा-क्लियर सूफ़ले कप (1.25 द्रव औंस आकार, डार्ट कंटेनर कॉर्प, मेसन, एमआई, यूएसए) में रखे नम फ़िल्टर पेपर पर अंडे देने की अनुमति दी गई। अंडों वाले फ़िल्टर पेपर को एक सीलबंद बैग (एससी जॉन्सन्स, रेसीन, विस्कॉन्सिन) में रखें और 26°C पर स्टोर करें। अंडों से लगभग 200-250 लार्वा निकले और उन्हें खरगोश के चारे (ज़ूप्रीम, प्रीमियम नेचुरल प्रोडक्ट्स, इंक., मिशन, केएस, यूएसए) और लीवर पाउडर (एमपी बायोमेडिकल्स, एलएलसी, सोलन, ओहायो, यूएसए) के मिश्रण वाले प्लास्टिक ट्रे में पाला गया। और मछली का फ़िलेट (टेट्रामिन, टेट्रा जीएमपीएच, मीर, जर्मनी) 2:1:1 के अनुपात में। हमारे जैव परीक्षणों में तीसरे चरण के अंतिम लार्वा का उपयोग किया गया था।
इस अध्ययन में प्रयुक्त पौधों के बीज निम्नलिखित वाणिज्यिक और सरकारी स्रोतों से प्राप्त किए गए थे: ब्रासिका जुनसिया (भूरी सरसों-पैसिफिक गोल्ड) और ब्रासिका जुनसिया (सफेद सरसों-इडा गोल्ड) पैसिफिक नॉर्थवेस्ट फार्मर्स कोऑपरेटिव, वाशिंगटन स्टेट, यूएसए से; (गार्डन क्रेस) केली सीड एंड हार्डवेयर कंपनी, पियोरिया, इलिनोइस, यूएसए से; और थलास्पी आर्वेन्स (फील्ड पेनीक्रेस-एलिजाबेथ) यूएसडीए-एआरएस, पियोरिया, इलिनोइस, यूएसए से। अध्ययन में प्रयुक्त किसी भी बीज पर कीटनाशकों का उपचार नहीं किया गया था। सभी बीज सामग्री को स्थानीय और राष्ट्रीय नियमों के अनुसार संसाधित किया गया और इस अध्ययन में उपयोग किया गया, साथ ही सभी संबंधित स्थानीय, राज्य और राष्ट्रीय नियमों का अनुपालन किया गया। इस अध्ययन में ट्रांसजेनिक पौधों की किस्मों का परीक्षण नहीं किया गया।
ब्रासिका जुनसिया (पीजी), अल्फाल्फा (एलएस), सफेद सरसों (आईजी) और थलास्पी आर्वेन्स (डीएफपी) के बीजों को 0.75 मिमी मेश और स्टेनलेस स्टील रोटर (12 दांत, 10,000 आरपीएम) से लैस रेट्सच जेडएम200 अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगल मिल (रेट्सच, हान, जर्मनी) का उपयोग करके बारीक पाउडर में पीसा गया (तालिका 1)। पिसे हुए बीज के पाउडर को एक पेपर थिम्बल में स्थानांतरित किया गया और सोक्सलेट उपकरण में 24 घंटे के लिए हेक्सेन के साथ वसा रहित किया गया। वसा रहित सरसों के एक उप-नमूने को मायरोसिनेज को निष्क्रिय करने और जैविक रूप से सक्रिय आइसोथियोसाइनेट बनाने के लिए ग्लूकोसिनोलेट्स के जल अपघटन को रोकने के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए ऊष्मा उपचारित किया गया। मायरोसिनेज को निष्क्रिय करके ऊष्मा उपचारित हॉर्सटेल बीज पाउडर (डीएफपी-एचटी) को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किया गया।
वसा रहित बीज पाउडर में ग्लूकोसिनोलेट की मात्रा का निर्धारण उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC) का उपयोग करके तीन बार किया गया, जो कि पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल 64 के अनुसार था। संक्षेप में, 250 मिलीग्राम वसा रहित बीज पाउडर के नमूने में 3 मिलीलीटर मेथनॉल मिलाया गया। प्रत्येक नमूने को 30 मिनट के लिए जल स्नान में ध्वनिक रूप से उपचारित किया गया और 23°C पर 16 घंटे के लिए अंधेरे में रखा गया। कार्बनिक परत के 1 मिलीलीटर भाग को फिर 0.45 माइक्रोमीटर फिल्टर से छानकर ऑटोसेम्प्लर में डाला गया। शिमाज़ू HPLC प्रणाली (दो LC 20AD पंप; SIL 20A ऑटोसेम्प्लर; DGU 20As डीगैसर; 237 nm पर निगरानी के लिए SPD-20A UV-VIS डिटेक्टर; और CBM-20A संचार बस मॉड्यूल) पर चलाकर, बीज पाउडर में ग्लूकोसिनोलेट की मात्रा का निर्धारण तीन बार किया गया। शिमाद्ज़ू एलसी सॉल्यूशन सॉफ़्टवेयर संस्करण 1.25 (शिमाद्ज़ू कॉर्पोरेशन, कोलंबिया, एमडी, यूएसए) का उपयोग किया गया। कॉलम एक सी18 इनर्टसिल रिवर्स फेज़ कॉलम (250 मिमी × 4.6 मिमी; आरपी सी-18, ओडीएस-3, 5यू; जीएल साइंसेज, टोरेंस, सीए, यूएसए) था। प्रारंभिक मोबाइल फेज़ की स्थिति 12% मेथनॉल/88% 0.01 एम टेट्राब्यूटाइलअमोनियम हाइड्रॉक्साइड (टीबीएएच; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) को पानी में मिलाकर 1 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर निर्धारित की गई थी। 15 μl नमूना इंजेक्ट करने के बाद, प्रारंभिक स्थितियों को 20 मिनट तक बनाए रखा गया, और फिर विलायक अनुपात को 100% मेथनॉल में समायोजित किया गया, जिससे नमूना विश्लेषण का कुल समय 65 मिनट हो गया। वसा रहित बीज के आटे में सल्फर की मात्रा का अनुमान लगाने के लिए, ताजे तैयार किए गए सिनापाइन, ग्लूकोसिनोलेट और मायरोसिन मानकों (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के क्रमिक तनुकरण द्वारा एक मानक वक्र (nM/mAb आधारित) उत्पन्न किया गया था। नमूनों में ग्लूकोसिनोलेट सांद्रता का परीक्षण एजिलेंट 1100 एचपीएलसी (एजिलेंट, सांता क्लारा, सीए, यूएसए) पर ओपनलैब सीडीएस केमस्टेशन संस्करण (C.01.07 SR2 [255]) का उपयोग करके किया गया था, जिसमें समान कॉलम लगा था और पहले से वर्णित विधि का उपयोग किया गया था। ग्लूकोसिनोलेट सांद्रता निर्धारित की गई थी; एचपीएलसी प्रणालियों के बीच तुलनीय होना चाहिए।
एलिल आइसोथियोसाइनेट (94%, स्थिर) और बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट (98%) फिशर साइंटिफिक (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए) से खरीदे गए थे। 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइलिसोथियोसाइनेट केमक्रूज़ (सांता क्रूज़ बायोटेक्नोलॉजी, कैलिफोर्निया, यूएसए) से खरीदा गया था। मायरोसिनेज़ एंजाइम द्वारा हाइड्रोलाइज़ किए जाने पर, ग्लूकोसिनोलेट्स, ग्लूकोसिनोलेट्स और ग्लूकोसिनोलेट्स क्रमशः एलिल आइसोथियोसाइनेट, बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट और 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइलिसोथियोसाइनेट बनाते हैं।
प्रयोगशाला जैव परीक्षण मुतुरी एट अल. 32 की विधि में कुछ संशोधनों के साथ किए गए। अध्ययन में पाँच कम वसा वाले बीज फ़ीड का उपयोग किया गया: डीएफपी, डीएफपी-एचटी, आईजी, पीजी और एलएस। बीस लार्वा को 120 मिलीलीटर विआयनीकृत जल (डीएच2ओ) युक्त 400 मिलीलीटर के डिस्पोजेबल तीन-तरफ़ा बीकर (वीडब्ल्यूआर इंटरनेशनल, एलएलसी, रैडनर, पीए, यूएसए) में रखा गया। मच्छर लार्वा विषाक्तता के लिए सात बीज पाउडर सांद्रता का परीक्षण किया गया: डीएफपी बीज पाउडर, डीएफपी-एचटी, आईजी और पीजी के लिए क्रमशः 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1 और 0.12 ग्राम बीज पाउडर/120 मिलीलीटर डीएच2ओ। प्रारंभिक जैव परीक्षणों से पता चलता है कि वसा रहित एलएस बीज पाउडर परीक्षण किए गए अन्य चार बीज पाउडर की तुलना में अधिक विषैला है। इसलिए, हमने एलएस बीज के चूर्ण की सात उपचार सांद्रता को निम्नलिखित सांद्रता में समायोजित किया: 0.015, 0.025, 0.035, 0.045, 0.055, 0.065 और 0.075 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O।
परीक्षण की स्थितियों में सामान्य कीट मृत्यु दर का आकलन करने के लिए एक अनुपचारित नियंत्रण समूह (dH20, बिना बीज चूर्ण पूरक के) शामिल किया गया था। प्रत्येक बीज चूर्ण के लिए विष विज्ञान संबंधी जैव परीक्षणों में तीन-ढलान वाले बीकरों (प्रत्येक बीकर में 20 तीसरे चरण के लार्वा) का उपयोग किया गया, कुल मिलाकर 108 शीशियाँ थीं। उपचारित कंटेनरों को कमरे के तापमान (20-21°C) पर रखा गया था और उपचार सांद्रता के निरंतर संपर्क में 24 और 72 घंटों के दौरान लार्वा मृत्यु दर दर्ज की गई थी। यदि पतले स्टेनलेस स्टील के स्पैटुला से छेदने या छूने पर मच्छर का शरीर और उपांग नहीं हिलते हैं, तो मच्छर के लार्वा को मृत माना जाता है। मृत लार्वा आमतौर पर कंटेनर के तल पर या पानी की सतह पर पृष्ठीय या अधर स्थिति में गतिहीन रहते हैं। प्रयोग को अलग-अलग दिनों में लार्वा के विभिन्न समूहों का उपयोग करके तीन बार दोहराया गया, कुल मिलाकर 180 लार्वा को प्रत्येक उपचार सांद्रता के संपर्क में लाया गया।
मच्छर के लार्वा पर AITC, BITC और 4-HBITC की विषाक्तता का आकलन एक ही जैव परीक्षण प्रक्रिया का उपयोग करके, लेकिन अलग-अलग उपचारों के साथ किया गया। प्रत्येक रसायन के लिए 100,000 ppm स्टॉक विलयन तैयार करने के लिए, 2-mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 900 µL शुद्ध इथेनॉल में 100 µL रसायन मिलाएं और अच्छी तरह से मिलाने के लिए 30 सेकंड तक हिलाएं। उपचार सांद्रता हमारे प्रारंभिक जैव परीक्षणों के आधार पर निर्धारित की गई थी, जिसमें पाया गया कि BITC, AITC और 4-HBITC की तुलना में कहीं अधिक विषैला है। विषाक्तता का निर्धारण करने के लिए, BITC की 5 सांद्रता (1, 3, 6, 9 और 12 ppm), AITC की 7 सांद्रता (5, 10, 15, 20, 25, 30 और 35 ppm) और 4-HBITC की 6 सांद्रता (15, 15, 20, 25, 30 और 35 ppm) का उपयोग किया गया। 30, 45, 60, 75 और 90 पीपीएम)। नियंत्रण उपचार में 108 μL शुद्ध इथेनॉल इंजेक्ट किया गया, जो रासायनिक उपचार की अधिकतम मात्रा के बराबर है। बायोएसेज़ को ऊपर बताए अनुसार दोहराया गया, जिसमें प्रत्येक उपचार सांद्रता पर कुल 180 लार्वा को शामिल किया गया। 24 घंटे के निरंतर संपर्क के बाद AITC, BITC और 4-HBITC की प्रत्येक सांद्रता के लिए लार्वा मृत्यु दर दर्ज की गई।
65 खुराक-संबंधी मृत्यु दर डेटा का प्रोबिट विश्लेषण पोलो सॉफ्टवेयर (पोलो प्लस, लेओरा सॉफ्टवेयर, संस्करण 1.0) का उपयोग करके किया गया, जिसमें 50% घातक सांद्रता (LC50), 90% घातक सांद्रता (LC90), ढलान, घातक खुराक गुणांक और 95% घातक सांद्रता की गणना की गई। यह गणना लॉग-परिवर्तित सांद्रता और खुराक-मृत्यु दर वक्रों के लिए घातक खुराक अनुपात के विश्वास अंतराल पर आधारित थी। मृत्यु दर डेटा प्रत्येक उपचार सांद्रता के संपर्क में आए 180 लार्वा के संयुक्त प्रतिकृति डेटा पर आधारित है। संभाव्यता विश्लेषण प्रत्येक बीज भोजन और प्रत्येक रासायनिक घटक के लिए अलग-अलग किए गए। घातक खुराक अनुपात के 95% विश्वास अंतराल के आधार पर, मच्छर के लार्वा के लिए बीज भोजन और रासायनिक घटकों की विषाक्तता को महत्वपूर्ण रूप से भिन्न माना गया, इसलिए 1 के मान वाले विश्वास अंतराल में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया, P = 0.0566।
वसा रहित बीज के आटे (डीएफपी, आईजी, पीजी और एलएस) में प्रमुख ग्लूकोसिनोलेट्स के निर्धारण के लिए एचपीएलसी परिणाम तालिका 1 में सूचीबद्ध हैं। डीएफपी और पीजी को छोड़कर, परीक्षण किए गए बीज के आटे में प्रमुख ग्लूकोसिनोलेट्स भिन्न थे, जिनमें दोनों में मायरोसिनेज ग्लूकोसिनोलेट्स मौजूद थे। पीजी में मायरोसिनिन की मात्रा डीएफपी की तुलना में अधिक थी, क्रमशः 33.3 ± 1.5 और 26.5 ± 0.9 मिलीग्राम/ग्राम। एलएस बीज पाउडर में 36.6 ± 1.2 मिलीग्राम/ग्राम ग्लूकोग्लाइकोन था, जबकि आईजी बीज पाउडर में 38.0 ± 0.5 मिलीग्राम/ग्राम सिनापाइन था।
एडीस एजिप्टी मच्छरों के लार्वा वसा रहित बीज पाउडर से उपचारित करने पर मर गए, हालांकि उपचार की प्रभावशीलता पौधे की प्रजाति के आधार पर भिन्न थी। केवल डीएफपी-एनटी ही 24 और 72 घंटे के संपर्क के बाद मच्छर के लार्वा के लिए विषैला नहीं था (तालिका 2)। सक्रिय बीज पाउडर की विषाक्तता सांद्रता बढ़ने के साथ बढ़ी (चित्र 1ए, बी)। 24 घंटे और 72 घंटे के आकलन में एलसी50 मानों के घातक खुराक अनुपात के 95% सीआई के आधार पर मच्छर के लार्वा के लिए बीज पाउडर की विषाक्तता में काफी भिन्नता पाई गई (तालिका 3)। 24 घंटे के बाद, एलएस बीज पाउडर का विषाक्त प्रभाव अन्य बीज पाउडर उपचारों की तुलना में अधिक था, जिसमें लार्वा के लिए उच्चतम सक्रियता और अधिकतम विषाक्तता थी (एलसी50 = 0.04 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O)। 24 घंटे के बाद, लार्वा डीएफपी के प्रति आईजी, एलएस और पीजी बीज पाउडर उपचारों की तुलना में कम संवेदनशील थे, जिनके एलसी50 मान क्रमशः 0.115, 0.04 और 0.08 ग्राम/120 मिलीलीटर डीएच2ओ थे, जो सांख्यिकीय रूप से 0.211 ग्राम/120 मिलीलीटर डीएच2ओ के एलसी50 मान से अधिक थे (तालिका 3)। डीएफपी, आईजी, पीजी और एलएस के एलसी90 मान क्रमशः 0.376, 0.275, 0.137 और 0.074 ग्राम/120 मिलीलीटर डीएच2ओ थे (तालिका 2)। डीपीपी की उच्चतम सांद्रता 0.12 ग्राम/120 मिलीलीटर डीएच2ओ थी। 24 घंटे के मूल्यांकन के बाद, औसत लार्वा मृत्यु दर केवल 12% थी, जबकि आईजी और पीजी लार्वा की औसत मृत्यु दर क्रमशः 51% और 82% तक पहुंच गई। 24 घंटे के मूल्यांकन के बाद, एलएस बीज भोजन उपचार की उच्चतम सांद्रता (0.075 ग्राम/120 मिलीलीटर डीएच2ओ) के लिए औसत लार्वा मृत्यु दर 99% थी (चित्र 1ए)।
एई. इजिप्शियन लार्वा (तीसरे चरण के लार्वा) की मृत्यु दर का अनुमान उपचार के 24 घंटे (A) और 72 घंटे (B) बाद बीज पाउडर की सांद्रता के प्रति खुराक प्रतिक्रिया (प्रोबिट) से लगाया गया था। बिंदीदार रेखा बीज पाउडर उपचार के LC50 को दर्शाती है। DFP थलास्पी आर्वेन्स, DFP-HT ऊष्मा निष्क्रिय थलास्पी आर्वेन्स, IG सिनाप्सिस अल्बा (इडा गोल्ड), PG ब्रासिका जुनसिया (पैसिफिक गोल्ड), Ls लेपिडियम सैटिवम।
72 घंटे के मूल्यांकन में, DFP, IG और PG बीज पाउडर के LC50 मान क्रमशः 0.111, 0.085 और 0.051 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O थे। Ls बीज पाउडर के संपर्क में आने वाले लगभग सभी लार्वा 72 घंटे के बाद मर गए, इसलिए मृत्यु दर के आंकड़े प्रोबिट विश्लेषण के अनुरूप नहीं थे। अन्य बीज पाउडर की तुलना में, लार्वा DFP बीज पाउडर उपचार के प्रति कम संवेदनशील थे और सांख्यिकीय रूप से उच्च LC50 मान रखते थे (तालिका 2 और 3)। 72 घंटे के बाद, DFP, IG और PG बीज पाउडर उपचारों के लिए LC50 मान क्रमशः 0.111, 0.085 और 0.05 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O अनुमानित किए गए। 72 घंटे के मूल्यांकन के बाद, DFP, IG और PG बीज पाउडर के LC90 मान क्रमशः 0.215, 0.254 और 0.138 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O थे। 72 घंटे के मूल्यांकन के बाद, 0.12 ग्राम/120 मिलीलीटर dH2O की अधिकतम सांद्रता पर DFP, IG और PG बीज पाउडर के उपचारों के लिए औसत लार्वा मृत्यु दर क्रमशः 58%, 66% और 96% थी (चित्र 1B)। 72 घंटे के मूल्यांकन के बाद, PG बीज पाउडर IG और DFP बीज पाउडर की तुलना में अधिक विषैला पाया गया।
सिंथेटिक आइसोथियोसाइनेट, एलिल आइसोथियोसाइनेट (AITC), बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट (BITC) और 4-हाइड्रॉक्सीबेंजाइल आइसोथियोसाइनेट (4-HBITC) मच्छर के लार्वा को प्रभावी ढंग से मार सकते हैं। उपचार के 24 घंटे बाद, BITC लार्वा के लिए अधिक विषैला पाया गया, जिसका LC50 मान 5.29 ppm था, जबकि AITC का LC50 मान 19.35 ppm और 4-HBITC का 55.41 ppm था (तालिका 4)। AITC और BITC की तुलना में, 4-HBITC की विषाक्तता कम है और इसका LC50 मान अधिक है। सबसे शक्तिशाली बीज पाउडर में मौजूद दो प्रमुख आइसोथियोसाइनेट (Ls और PG) की मच्छर लार्वा विषाक्तता में महत्वपूर्ण अंतर हैं। AITC, BITC और 4-HBITC के बीच LC50 मानों के घातक खुराक अनुपात पर आधारित विषाक्तता में सांख्यिकीय अंतर पाया गया, जिसमें LC50 घातक खुराक अनुपात के 95% CI में 1 का मान शामिल नहीं था (P = 0.05, तालिका 4)। BITC और AITC दोनों की उच्चतम सांद्रता परीक्षण किए गए सभी लार्वा को 100% तक नष्ट करने में सक्षम पाई गई (चित्र 2)।
एई. की खुराक प्रतिक्रिया (प्रोबिट) से मृत्यु दर वक्रों का अनुमान लगाया गया था। उपचार के 24 घंटे बाद, मिस्र के लार्वा (तीसरे चरण के लार्वा) सिंथेटिक आइसोथियोसाइनेट सांद्रता तक पहुँच गए। बिंदीदार रेखा आइसोथियोसाइनेट उपचार के लिए LC50 को दर्शाती है। बेंजाइल आइसोथियोसाइनेट BITC, एलिल आइसोथियोसाइनेट AITC और 4-HBITC।
मच्छरों को नियंत्रित करने के लिए पौधों से प्राप्त जैविक कीटनाशकों के उपयोग का अध्ययन लंबे समय से किया जा रहा है। कई पौधे प्राकृतिक रसायन उत्पन्न करते हैं जिनमें कीटनाशक गुण होते हैं।37 उनके जैव-सक्रिय यौगिक सिंथेटिक कीटनाशकों का एक आकर्षक विकल्प प्रदान करते हैं, जिनमें मच्छरों सहित कीटों को नियंत्रित करने की अपार क्षमता है।
सरसों के पौधे की खेती बीजों के लिए की जाती है, जिनका उपयोग मसाले और तेल के स्रोत के रूप में किया जाता है। जब बीजों से सरसों का तेल निकाला जाता है या जब सरसों को जैव ईंधन के रूप में उपयोग के लिए निकाला जाता है, तो उप-उत्पाद वसा रहित बीज का चूर्ण होता है। इस बीज के चूर्ण में इसके कई प्राकृतिक जैव रासायनिक घटक और जलनाशक एंजाइम बरकरार रहते हैं। इस बीज के चूर्ण की विषाक्तता का कारण आइसोथियोसाइनेट का उत्पादन है। आइसोथियोसाइनेट का निर्माण बीज के चूर्ण के जलयोजन के दौरान मायरोसिनेज एंजाइम द्वारा ग्लूकोसिनोलेट के जल अपघटन से होता है। इनमें कवकनाशी, जीवाणुनाशक, परावैद्युतनाशक और कीटनाशक प्रभाव के साथ-साथ रासायनिक संवेदी प्रभाव और कीमोथेरेप्यूटिक गुण भी पाए जाते हैं। कई अध्ययनों से पता चला है कि सरसों के पौधे और बीज का चूर्ण मिट्टी और भंडारित खाद्य पदार्थों के कीटों के खिलाफ प्रभावी रूप से धूमनकारी के रूप में कार्य करते हैं। इस अध्ययन में, हमने एडीज मच्छर के लार्वा पर चार बीज के चूर्ण और इसके तीन जैवसक्रिय उत्पादों AITC, BITC और 4-HBITC की विषाक्तता का आकलन किया। मच्छर के लार्वा युक्त पानी में बीज का चूर्ण सीधे मिलाने से एंजाइमेटिक प्रक्रियाएं सक्रिय हो जाती हैं, जिससे आइसोथियोसाइनेट उत्पन्न होते हैं जो मच्छर के लार्वा के लिए विषैले होते हैं। इस जैव-परिवर्तन को बीज के चूर्ण की लार्वानाशक गतिविधि और बौने सरसों के बीज के चूर्ण को उपयोग से पहले ऊष्मा उपचारित करने पर कीटनाशक गतिविधि में कमी से आंशिक रूप से प्रदर्शित किया गया। ऊष्मा उपचार से ग्लूकोसिनोलेट्स को सक्रिय करने वाले हाइड्रोलाइटिक एंजाइम नष्ट हो जाते हैं, जिससे जैवसक्रिय आइसोथियोसाइनेट का निर्माण रुक जाता है। जलीय वातावरण में मच्छरों के विरुद्ध गोभी के बीज के चूर्ण के कीटनाशक गुणों की पुष्टि करने वाला यह पहला अध्ययन है।
परीक्षण किए गए बीज पाउडरों में, जलकुटी बीज पाउडर (Ls) सबसे अधिक विषैला था, जिससे एडीस एल्बोपिक्टस मच्छरों की उच्च मृत्यु दर हुई। एडीस एजिप्टी लार्वा को 24 घंटे तक लगातार संसाधित किया गया। शेष तीन बीज पाउडरों (PG, IG और DFP) की गतिविधि धीमी थी और 72 घंटे के निरंतर उपचार के बाद भी इनसे महत्वपूर्ण मृत्यु दर हुई। केवल Ls बीज पाउडर में ही ग्लूकोसिनोलेट्स की महत्वपूर्ण मात्रा पाई गई, जबकि PG और DFP में मायरोसिनेज और IG में प्रमुख ग्लूकोसिनोलेट के रूप में ग्लूकोसिनोलेट मौजूद था (तालिका 1)। ग्लूकोट्रोपेओलिन हाइड्रोलाइज्ड होकर BITC बनाता है और सिनालबिन हाइड्रोलाइज्ड होकर 4-HBITC61,62 बनाता है। हमारे जैव परीक्षण परिणामों से पता चलता है कि Ls बीज पाउडर और सिंथेटिक BITC दोनों ही मच्छर लार्वा के लिए अत्यधिक विषैले हैं। PG और DFP बीज पाउडर का मुख्य घटक मायरोसिनेज ग्लूकोसिनोलेट है, जो हाइड्रोलाइज्ड होकर AITC बनाता है। AITC मच्छर के लार्वा को मारने में प्रभावी है, जिसका LC50 मान 19.35 ppm है। AITC और BITC की तुलना में, 4-HBITC आइसोथियोसाइनेट लार्वा के लिए सबसे कम विषैला है। हालांकि AITC, BITC से कम विषैला है, लेकिन मच्छर के लार्वा पर परीक्षण किए गए कई आवश्यक तेलों की तुलना में इनका LC50 मान कम है32,73,74,75।
मच्छरों के लार्वा के खिलाफ इस्तेमाल होने वाले हमारे क्रूसिफेरस बीज पाउडर में एक प्रमुख ग्लूकोसिनोलेट होता है, जो एचपीएलसी द्वारा निर्धारित कुल ग्लूकोसिनोलेट्स का 98-99% से अधिक है। अन्य ग्लूकोसिनोलेट्स की थोड़ी मात्रा पाई गई, लेकिन उनका स्तर कुल ग्लूकोसिनोलेट्स के 0.3% से कम था। वाटरक्रेस (एल. सैटिवम) बीज पाउडर में द्वितीयक ग्लूकोसिनोलेट्स (सिनिग्रिन) होते हैं, लेकिन उनका अनुपात कुल ग्लूकोसिनोलेट्स का 1% है, और उनकी मात्रा अभी भी नगण्य है (लगभग 0.4 मिलीग्राम/ग्राम बीज पाउडर)। हालांकि पीजी और डीएफपी में एक ही मुख्य ग्लूकोसिनोलेट (मायरोसिन) होता है, लेकिन उनके बीज पाउडर की लार्वानाशक गतिविधि उनके एलसी50 मानों के कारण काफी भिन्न होती है। पाउडरी मिल्ड्यू के प्रति विषाक्तता भिन्न होती है। एडीज एजिप्टी लार्वा का निकलना दोनों बीज पाउडरों के बीच मायरोसिनेज गतिविधि या स्थिरता में अंतर के कारण हो सकता है। मायरोसिनेज गतिविधि ब्रैसिकेसी पौधों में आइसोथियोसाइनेट जैसे हाइड्रोलिसिस उत्पादों की जैव उपलब्धता में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है।76 पोकॉक एट अल.77 और विल्किंसन एट अल.78 की पिछली रिपोर्टों से पता चला है कि मायरोसिनेज गतिविधि और स्थिरता में परिवर्तन आनुवंशिक और पर्यावरणीय कारकों से भी जुड़े हो सकते हैं।
संबंधित रासायनिक अनुप्रयोगों के साथ तुलना करने के लिए, प्रत्येक बीज भोजन के 24 और 72 घंटों के LC50 मानों के आधार पर अपेक्षित जैवसक्रिय आइसोथियोसाइनेट सामग्री की गणना की गई (तालिका 5)। 24 घंटों के बाद, बीज भोजन में आइसोथियोसाइनेट शुद्ध यौगिकों की तुलना में अधिक विषैले थे। आइसोथियोसाइनेट बीज उपचारों के पार्ट्स प्रति मिलियन (ppm) के आधार पर गणना किए गए LC50 मान BITC, AITC और 4-HBITC अनुप्रयोगों के LC50 मानों से कम थे। हमने लार्वा को बीज भोजन की गोलियां खाते हुए देखा (चित्र 3A)। परिणामस्वरूप, लार्वा बीज भोजन की गोलियां खाने से विषैले आइसोथियोसाइनेट के अधिक सांद्रित संपर्क में आ सकते हैं। यह 24 घंटे के संपर्क में IG और PG बीज भोजन उपचारों में सबसे अधिक स्पष्ट था, जहां LC50 सांद्रता शुद्ध AITC और 4-HBITC उपचारों की तुलना में क्रमशः 75% और 72% कम थी। एलएस और डीएफपी उपचार शुद्ध आइसोथियोसाइनेट की तुलना में अधिक विषैले थे, जिनके एलसी50 मान क्रमशः 24% और 41% कम थे। नियंत्रण उपचार में लार्वा सफलतापूर्वक प्यूपा में परिवर्तित हो गए (चित्र 3बी), जबकि बीज भोजन उपचार में अधिकांश लार्वा प्यूपा में परिवर्तित नहीं हुए और लार्वा का विकास काफी विलंबित हुआ (चित्र 3बी,डी)। स्पोडोप्टेरा लिटुरा में, आइसोथियोसाइनेट वृद्धि मंदता और विकासीय विलंब से संबंधित हैं79।
एडीस एजिप्टी मच्छरों के लार्वा को 24-72 घंटों तक लगातार ब्रासिका बीज पाउडर के संपर्क में रखा गया। (A) मृत लार्वा जिनके मुखांगों में बीज पाउडर के कण मौजूद थे (गोलाकार भाग); (B) नियंत्रण उपचार (बिना बीज पाउडर मिलाए dH20) दर्शाता है कि लार्वा सामान्य रूप से विकसित होते हैं और 72 घंटों के बाद प्यूपा बनने लगते हैं। (C, D) बीज पाउडर से उपचारित लार्वा; बीज पाउडर के प्रभाव से उनके विकास में अंतर देखा गया और वे प्यूपा नहीं बने।
हमने मच्छर के लार्वा पर आइसोथियोसाइनेट के विषाक्त प्रभावों की क्रियाविधि का अध्ययन नहीं किया है। हालांकि, लाल चींटियों (Solenopsis invicta) पर किए गए पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ग्लूटाथियोन एस-ट्रांसफरेज (GST) और एस्टेरेज (EST) का अवरोध आइसोथियोसाइनेट की जैव सक्रियता का मुख्य तंत्र है, और AITC, कम सक्रियता पर भी, GST की सक्रियता को कम सांद्रता में बाधित कर सकता है। खुराक 0.5 µg/ml80 है। इसके विपरीत, AITC वयस्क कॉर्न वीविल (Sitophilus zeamais)81 में एसिटाइलकोलिनेस्टेरेज को बाधित करता है। मच्छर के लार्वा में आइसोथियोसाइनेट की सक्रियता की क्रियाविधि को स्पष्ट करने के लिए इसी प्रकार के अध्ययन किए जाने चाहिए।
हम इस प्रस्ताव का समर्थन करने के लिए ऊष्मा-निष्क्रिय डीएफपी उपचार का उपयोग करते हैं कि पौधों के ग्लूकोसिनोलेट्स का जल अपघटन करके प्रतिक्रियाशील आइसोथियोसाइनेट्स का निर्माण करना सरसों के बीज के चूर्ण द्वारा मच्छर के लार्वा नियंत्रण के लिए एक क्रियाविधि के रूप में कार्य करता है। परीक्षण की गई अनुप्रयोग दरों पर डीएफपी-एचटी बीज चूर्ण विषैला नहीं था। लाफार्गा एट अल. 82 ने बताया कि ग्लूकोसिनोलेट्स उच्च तापमान पर अपघटन के प्रति संवेदनशील होते हैं। ऊष्मा उपचार से बीज चूर्ण में मायरोसिनेज एंजाइम के विकृतीकरण और ग्लूकोसिनोलेट्स के जल अपघटन से प्रतिक्रियाशील आइसोथियोसाइनेट्स के निर्माण को रोकने की भी उम्मीद है। इसकी पुष्टि ओकुनाडे एट अल. 75 ने भी की, जिन्होंने दिखाया कि मायरोसिनेज तापमान के प्रति संवेदनशील होता है, और यह दर्शाता है कि जब सरसों, काली सरसों और रक्तमूल के बीजों को 80°C से अधिक तापमान पर रखा गया तो मायरोसिनेज गतिविधि पूरी तरह से निष्क्रिय हो गई। इन क्रियाविधियों के परिणामस्वरूप ऊष्मा-उपचारित डीएफपी बीज चूर्ण की कीटनाशक गतिविधि में कमी आ सकती है।
इस प्रकार, सरसों के बीज का चूर्ण और इसके तीन प्रमुख आइसोथियोसाइनेट मच्छर के लार्वा के लिए विषैले होते हैं। बीज के चूर्ण और रासायनिक उपचारों के बीच इन अंतरों को देखते हुए, बीज के चूर्ण का उपयोग मच्छर नियंत्रण का एक प्रभावी तरीका हो सकता है। बीज के चूर्ण के उपयोग की प्रभावकारिता और स्थिरता में सुधार के लिए उपयुक्त फॉर्मूलेशन और प्रभावी वितरण प्रणालियों की पहचान करने की आवश्यकता है। हमारे परिणाम सिंथेटिक कीटनाशकों के विकल्प के रूप में सरसों के बीज के चूर्ण के संभावित उपयोग को दर्शाते हैं। यह तकनीक मच्छर वाहकों को नियंत्रित करने का एक अभिनव उपकरण बन सकती है। चूंकि मच्छर के लार्वा जलीय वातावरण में पनपते हैं और बीज के चूर्ण में मौजूद ग्लूकोसिनोलेट्स जलयोजन पर एंजाइमेटिक रूप से सक्रिय आइसोथियोसाइनेट में परिवर्तित हो जाते हैं, इसलिए मच्छर-ग्रस्त पानी में सरसों के बीज के चूर्ण का उपयोग महत्वपूर्ण नियंत्रण क्षमता प्रदान करता है। हालांकि आइसोथियोसाइनेट की लार्वानाशक गतिविधि भिन्न होती है (BITC > AITC > 4-HBITC), यह निर्धारित करने के लिए और अधिक शोध की आवश्यकता है कि क्या बीज के चूर्ण को कई ग्लूकोसिनोलेट्स के साथ मिलाने से विषाक्तता में सहक्रियात्मक वृद्धि होती है। यह पहला अध्ययन है जो वसा रहित पत्तागोभी के बीज के चूर्ण और तीन जैवसक्रिय आइसोथियोसाइनेट के मच्छरों पर कीटनाशक प्रभाव को दर्शाता है। इस अध्ययन के परिणाम एक नई मिसाल कायम करते हैं, जिसमें दिखाया गया है कि वसा रहित पत्तागोभी के बीज का चूर्ण, जो बीजों से तेल निकालने का एक उप-उत्पाद है, मच्छरों के लार्वा को नष्ट करने में एक कारगर उपाय हो सकता है। यह जानकारी पौधों पर आधारित जैविक नियंत्रण एजेंटों की खोज और उन्हें सस्ते, व्यावहारिक और पर्यावरण के अनुकूल जैव कीटनाशकों के रूप में विकसित करने में सहायक हो सकती है।
इस अध्ययन के लिए तैयार किए गए डेटासेट और उनसे प्राप्त विश्लेषण उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से प्राप्त किए जा सकते हैं। अध्ययन के अंत में, अध्ययन में प्रयुक्त सभी सामग्री (कीड़े और बीज का चूर्ण) नष्ट कर दी गईं।